教学PPT高通量筛选技术基因工程育种筛选保藏.pptVIP

菌种退化的防止： 5.采用有效的菌种保藏方法 用于工业生产的一些微生物菌种，其主要性状都属于数量性状，而这类性状恰是最容易退化的。因此，有必要研究和制定出更有效的菌种保藏方法以防止菌种退化. 三、菌种的复壮及其方法 菌种的复壮（rejuvenation）：使衰退的菌种恢复原来优良性状。狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施； 广义的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种 三、菌种复壮的方法 1.纯种分离 2.淘汰法 3.宿主体内复壮法 三、菌种复壮的方法 1.纯种分离 三、菌种复壮的方法 1.纯种分离------显微操作装置 三、菌种复壮的方法 3.宿主体内复壮法 如Bacillus thuringiensis主要是对一些寄生性的菌株,可以将衰退的菌株接种到相应的宿主体内,提高其寄生性能及其它性能。 第二节 工业微生物菌种的保藏 菌种保藏：广泛收集实验室和生产菌种、菌株，将它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、不污染便于研究、交换和使用。 影响因素：干燥 低温 第二节 工业微生物菌种的保藏 （一）斜面保藏法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至4℃冰箱中保藏。 保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。 第二节 工业微生物菌种的保藏 （一）斜面保藏法 第二节 工业微生物菌种的保藏 （一）斜面保藏法 实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。 第二节 工业微生物菌种的保藏 （二）液体石蜡油保藏法 （1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，121．3℃灭菌60-80分钟，然后放在80℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。 （2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。 （3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝。 第二节 工业微生物菌种的保藏 （二）液体石蜡油保藏法 优点：制作简单，不需特殊设备，不需经常移种。 缺点：是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。 第二节 工业微生物菌种的保藏 （三）干燥保藏法 1.砂土保藏法 将沙或土过筛、烘干、装管、灭菌、然后将菌种制成孢子悬液滴入其中混匀，放到盛氯化钙的干燥器里吸除水分，干燥后保存或用火焰封管后保存。吸附在干燥沙土上的孢子因缺水而处于休眠状态，可保存较长时期。此法适用于芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、放线菌、镰刀菌等。 （三）干燥保藏法 2.滤纸条保藏法 3.无水硅胶保藏法 4.麸皮保藏法 将麸皮制成培养基,培养要保存的菌种,待生长良好后，置干燥器中保存。这是根据中国酿造酒、醋、酱时制曲的经验所采用的一种保藏方法，适用于谷物微生物区系中的种类。  第二节 工业微生物菌种的保藏 （四）冷冻干燥保藏法 将细胞悬液每0.1～0.2毫升注入一无菌安瓿瓶,于-40℃预冻1小时，再于-20～30℃、真空度为13.3帕的条件下脱水。在脱水过程后期，安瓿瓶外温度可逐渐升至25℃。脱水后的样品含水量应在 3％以下。最后，将安瓿瓶保持真空度 1.3帕，用火焰溶封，置10℃保存。 （四）冷冻干燥保藏法 为防止细胞在冻结和脱水过程中损伤或死亡，要用保护剂制备细胞悬液。保护剂有脱脂牛奶、血清、10％蔗糖或葡萄糖溶液等，其作用是通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力来稳定细胞成分的构型。 此法适用于病毒、衣原体、枝原体、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等的长期保存，是当前保藏菌种的一个重要方法。但是，盐杆菌、发光杆菌、粘杆菌、阿舒囊霉、多囊霉、担子菌中的大多数属种不适用于此法保存。  （四）液氮低温保藏法 用甘油或二甲亚砜(DMSO)作保护剂制备细胞悬液，分装入无菌安瓿瓶,每管0.2毫升，在控制温度下降速率为1℃/分钟的条件下预冻至-40℃，然后立即放入液氮生物贮存罐中气相(-150℃)保存。恢复培养时，先直接侵入38℃水浴中解冻 5～10分钟，再种植于适宜培养基内培养。 是在低于-130℃时一切生化反应