分子遗传学第六讲 RNA 遗传.ppt

1. RNA世界- 生命早期的遗传物质 RNA世界假说认为在生命进化早期没有蛋白质酶，某些RNA序列可以催化RNA的复制。也就是说，RNA是生命早期的唯一遗传物质，它是生命的源头。在RNA遗传的基础上，才有了后来的DNA与蛋白质体系。事实上，RNA的遗传作用并未在生命的进化中消失，在一定程度上，RNA仍在支配着DNA与蛋白质的命运。 Johnston WK等的工作证明某种RNA分子确实能够催化RNA复制中的多聚化。它使用NTP及RNA模板的编码信息使RNA引物（RNA primer）持续增加14个核苷酸的长度，等于RNA螺旋的一圈。这种多聚化是RNA模板依赖的，是按照引物的序列、长度，以及RNA模板的信息进行的，证明了引物的3’是在与RNA模板逐一地、严格地配对的情况下进行的。结果，多聚化过程是逼真的；在引物被扩展11个核苷酸的情况下，对此等序列进行了克隆和序列分析，在1100个样品中有1088个是与模板准确匹配的。 Bartel等使用存在于随机RNA序列的备用池中的RNA-连接酶ribozyme衍生物。某些衍生物能够使用NTP及RNA模板的部分区域进行模板指导的引物延伸。这些连接酶衍生物通过与模板的不配对的一特异小段的杂交来识别并催化该引物----模板复合体的RNA复制。从使用特异模板的一小段来指导引物延伸来看，这些ribozymes不像复制RNA/DNA的酶的多聚化反应更类似于末端酶。 从上述可知，W.K.Johnston等所描述的RNA复制虽然效率不高，却是真正的RNA自我复制，因为它不像DNA复制那样，需要许多蛋白质酶来进行加工。而这里的RNA复制，这不需要任何的蛋白质，完全由RNA酶及RNA模板完成。而通常的DNA/RNA病毒的复制（繁殖）以及细胞的DNA复制都不是由纯粹的DNA或RNA系统完成的。因此，RNA无疑地是一种分子模板。 就在修正后的最新版本的中心法则中，我们看到RNA已不是过去的中间环节，而是具有与DNA同等地位的遗传模板。 2、RNA干涉现象 2.1 RNAi的分子机制 RNA对基因表达的调控称为RNA干涉。 RNAi是一种转录后的基因沉默现象，是dsRNA触发细胞质中与其同源的mRNA的降解，或在细胞核中dsRNA诱导同源的DNA的后生修饰（甲基化）而导致转录水平上的沉默。RNA沉默是一种阻遏外来序列的有效手段，并在植物及动物发育中有重要作用。 关于RNAi作用机制大概如下：在不同的生物中，不同来源的双链RNA被DICER（含有螺旋酶，dsRNA结合域，及PAZ域）裂解为一种具有特异序列的活性中间体----21-23核苷酸长的双链的siRNA。然后，siRNA结合核酸酶复合物（RISC的蛋白质部分）形成所谓RNA诱导沉默复合物（RISC）。激活的RISC依靠siRNA中的一条链去寻找互补的mRNA链，然后RISC中的核酸内切酶Argonaute2在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA，从而将mRNA降解。同时siRNAs作用于核中的DNA同源序列，产生RNA-DNA双链和单链凸起，吸引DNA重新甲基化转移酶，导致DNA的甲基化。 2.2 siRNA的产生与扩增 在线虫中，小量的dsRNA能够作用于大量的靶mRNA。这是因为dsRNA在转变为siRNA的过程中，至少有三种扩增的途径。1、Dicer酶（含有螺旋酶，dsRNA结合域，及PAZ域）可以把长的dsRNA截成10—20段，等于扩增10—20倍。2、存在一种催化机制，siRNA常常成倍地增加，以用于进一步的扩增。3、短的RNAs能作为靶mRNA的引物，在RNA依赖的RNA多聚酶的作用下，启动一个RNA指导的RNA多聚化反应，随后产生许多“次级siRNAs”，称之为靶指导的扩增。 首先dsRNA被切成短的siRNA，使dsRNA转换成ssRNA。这些单链的siRNA（与蛋白质结合）如果没有识别同源的靶mRNA，并与之配对，就会被降解掉。一旦反义的siRNA与靶mRNA配对，则靶指导的siRNA的扩增就会发生。这时，与靶mRNA配对的siRNA小段将沿mRNA延伸（双向的或单向的），但只能延伸几百个碱基左右就停止，并从该区裂解下来而成为次级siRNA。这种效应称为“可迁移效应”。于是，siRNA与靶mRNA的稳定化与“可迁移效应”的结合就形成了一个链式反应，在这个反应中，随着Dicer的作用、siRNA引物的更新，以及新的一轮的扩增，将发生siRNA的多轮的复制。 应该注意到，这种复制或扩增，并不是自我复制/扩增，而是从primerA产生primerB, primerC, primerD等，这是一个从局部延伸为全体，再从全体裂解为若干局部的过程。 2.3 RNAi的遗传 注射dsRNA到线虫两性体，在子一代产生的基因沉默往往在F2代