基于碳纳米管修饰电极检测有机磷农药的生物传感器.docx

基于碳纳米管修饰电极检测有机磷农药的生物传感器润 , 郝玉翠 , 康天放 Ξ刘(北京工业大学环境与能源工程学院 , 北京 100022)摘 要 :报道了一种用于检测有机磷农药的安培型生物传感器 , 利用戊二醛交联法将乙酰胆碱酯酶和牛血清白蛋白固定在羧基化多壁碳纳米管修饰玻碳电极 表面 , 制备了可应用于检测有机磷农药的新型生物传感器 , 并确定了最佳工作 条件 。该方法具有良好的重现性和回收率 , 当辛硫磷及氧化乐果的浓度分别在5 . 0 ×10 - 4 ～5 . 0 ×10 - 1 gΠL 和 1 . 0 ×10 - 3 ～5 . 0 ×10 - 1 gΠL 范围内时 , 抑制率与其浓度的对数呈线性关系 , 检出限按抑制率为 10 %时的农药浓度计算 , 可分别达 到 3 . 6 ×10 - 4 gΠL 和 5 . 9 ×10 - 4 gΠL 。关键词 :生物传感器 ; 碳纳米管 ; 乙酰胆碱酯酶 ; 有机磷农药中图分类号 :O657. 1文献标识码 :A文章编号 :100020720 (2007) 092009204气相色谱法和高效液相色谱法等广泛用于有机磷农药的测定 , 但都需要比较长的分析时间和 样品前处理等1 , 所以 , 建立快速 、灵敏 、可靠的 有机磷农药的检测方法对环境保护和食品安全都 具有重要的意义 。乙酰胆碱酯酶 (AChE) 能够选择 性地催化底物水解 , 且其催化活性能被有机磷农 药或氨基甲酸酯类农药所抑制 , 利用这一特性可 制成用于测定有机磷农药的生物传感器2 。碳纳 米管是一类新型的纳米材料 , 它具有很高的比表 面积和优良的电催化性能 , 利用碳纳米管制备各 类电化学生物传感器的研究已经有文献报道3 , 4 。 但将碳纳米管用于制备有机磷农药生物传感器的 文献报道很少5 。本文采用戊二醛作为交联剂 , 牛血清白蛋白 作惰 性 蛋 白 质 , 将 AChE 固 定 在 多 壁 碳 纳 米 管 (MWNT) 修饰玻碳电极表面 , 制成生物传感器 , 用 电化学分析方法检测了有机磷农药 , 对生物传感 器的制备条件及应用进行了研究 。1实验部分1 . 1仪器和试剂CHI660A 电化学工作站 (上海辰华仪器有限公司) , PHS - 3C 精密型酸度计 ( 上海雷磁仪器厂) 。电化学实验均采用三电极系统 : 玻碳电极 ( GCE) 或生物传感器作为工作电极 , 饱和甘汞电极 ( SCE) 为参比电极 , 铂电极为对电极 。乙酰 胆 碱 酯 酶 ( EC3 . 1 . 1 . 7 ; type Ⅲ, Sigma 公 司) , 氯化乙酰硫代胆碱 (AsCh) 和氯化212甲基吡啶222甲醛肟 (22PAM) 购自 Sigma 公司 , 多壁碳纳米管 由清华大学化工系反应工程实验室提供 , 农药为40 %氧化 乐 果 乳 油 ( 河 北 新 兴 化 工 有 限 公 司 ) 和40 %辛硫磷乳油 ( 山东和乐集团乐陵农药厂) , 农 药浓度根据所标示的有效成分计算 。其它试剂均 为分析纯 。1 . 2 生物传感器的制备采用 浓 HNO3 回 流 的 方 法 将 MWNT 羧 基 化 :MWNT 于 120 ℃烘干研磨 , 浓 HCl 中超声 7 h 纯 化 , 二次水洗至中性 , 抽滤 , 120 ℃烘干研磨 。浓 HNO3 中 140 ℃回流 5 h , 二次水洗至中性 , 抽滤 ,120 ℃烘干研至粉末 , 备用 。称取 5 mg 上述 MWNT 粉末超声分散于 10 mL N ,N2二甲基甲酰胺 (DMF) 溶剂中 , 形成黑色液 , 备用 。在抛光机上用粒径为Ξ 收稿日期 : 2006207227 ;修订日期 : 2006210221基金项目 : 国家自 然 科 学 基 金 ( 、北 京 市 自 然 科 学 基 金 ( 8062010) 和 北 京 市 教 育 委 员 会 科 技 发 展 基 金( Km200310005008) 项目资助作者简介 : 刘 润 (1980 - ) , 女 , 硕士研究生— 9—第 26 卷第 9 期2007 年 9 月分析试验室Chinese Journal of Analysis LaboratoryVol . 26. No . 92007 - 90 . 5 μm 的 Al2 O3 粉悬浊液将玻碳电极抛光成镜面后 , 再用蒸馏水清洗干净 , 分别在乙醇和二次水 中超声清洗 5 min , 取上述分散液 4μL 滴于电极表 面 , 室温下自然干燥 。将 50μL 0 . 1 UΠμL 的乙酰胆碱酯酶溶液 , 5μL5 %的戊二醛溶液和 5μL 体积分数 4 %的牛血清白 蛋白 (BSA) 溶液充分混合 。取