少孢根霉发酵生产超氧化物歧化酶初探.docx

Ξ少孢根霉发酵生产超氧化物歧化酶初探江汉湖1董明盛1张羽航姚汝华(华南理工大学食品与生物工程学院 , 广州 510641 ;1 南京农业大学食品科技学院 , 南京 210095)摘 要 对少孢根霉 R T23 ( R hi z op us ol i gos por us sai to R T23) 固体发酵向胞外分泌超氧化物歧化酶的条件进行了研究 。酶液的制备采用 p H812 ,50mmol/ L 的磷酸缓冲液 ,离心取上清液 。R T23发酵 42 h 后酶活达到最大 (142U/ ml) 。适宜的接种量为 015 %～1 % 。添加 10 %的水有利于产酶 。 培养温度宜采用变温方式 ,即在 37 ℃下培养 24 h ,之后 28 ℃培养 18 h 。关键词 超氧化物歧化酶 ; 少孢根霉 ; 酶制备 ; 发酵超氧化物歧 化 酶 ( Supero xide Dismutase简称 SOD) 是一种广泛存在于生物体内的含 铜 ,锌或锰和铁的金属酶 ,它催化超氧阴离子水至 1000 ml , 用 乳 酸 调 p H5 ～ 515 , 分 装 ,011M Pa 灭菌 30 min 。11213固 体 发 酵 培 养 基精 选 大 豆 , 浸 泡自由 基 ( O —·) 转 变 为 H O 和 O 的 歧 化 反16～18 h ,去皮 , 煮沸 30 min , 沥尽水 , 按湿重1 %添加乳酸 。22 22应 ,从而消除体内多余的 O —· ,解除 O —· 对生22物性的毒性 。目前有关 SOD 的国内外报道都是胞内酶 ,发酵生产该酶需破碎胞壁 ,工作 难度 大 且 繁 琐1 ,2 。我 们 发 现 从 少 孢 根 霉 R T23 ( R hi z op us ol i gos por us s ai t o R T23) 固体 发酵 培 养 物 可 以 直 接 抽 提 得 到 SOD 。为 了 能够简 便 大 量 生 产 , 我 们 初 步 研 究 了 R T23的固体发酵特性 。2方法211 培养方法经液体培养基培养获得的少孢根霉 R T23 菌丝 , 捣碎后与赋形剂混匀 。在固体发酵 培养基中接种发酵剂 ,然后 35 ℃培养3 。212 SOD 粗酶液的制备4 ,521211 静置时间的确定 取培养物按每 g 加 5 ml 50 mmol/ L (p H813) 的磷酸缓冲液 , 于食品加工机搅打 10 s ,分成 4 份 ,分别静置1 ,12 h 和 4 ℃振荡 1 , 112 h , 12000r/ min 离心15 min ,取上清液测定 SOD 活性 。上述步骤 均于 4 ℃下进行 。21212 搅打时间的确定 取培养物按每 g加 5 ml 50 mmol/ L ( p H813) 的磷酸缓冲液 ,于 食品加工机搅打 10 , 30 , 40 , 60s ,静量 1 h , 于12 000r/ min 离心 15 min ,取上清液测定 SOD活力 。上述步骤均于 4 ℃下进行 。213 发酵过程的动力学分析1材料111实验菌株少 孢 根 霉 R T23 ( R hi z op usol i gos por usS ai t o R T23) 由南京农业大学食品微生物 组筛选并通过鉴定 。112培养基11211斜面培养基PDA 培养基 。11212液 体 培 养 基豆 芽 1000g 加 入1000 ml 水煮沸 30 min ,纱布过滤 。滤汁加入葡萄 糖 3 % , ( N H4 ) 2 SO4 014 % , MgSO4 ·7 H2 O 0125 % 和 KH2 PO4 011 % 。溶 解 并 补Ξ 收稿日期 1998206229151张羽航等 :少孢根霉发酵生产超氧化物歧化酶初探21311菌 丝 体 生 物 量 的 评 估采 用 Kro2SOD 酶活 、p H 和品温变化见图 1 与图 2 。nenberg 等的方法 ,于培养物发酵的不同时间分别 取 样 用 肉 质 检 测 仪 检 测 培 养 物 的 质地6 ,7。21312p H于培养物发酵的不同时间分别取样 15g , 加 入 30 ml 去 离 子 水 , 搅 拌 1 min ,测量 p H ,测量值代表大豆表面的 p H6 。21313品温不同时间测量培养物表面的 温度214酶活测定Fig 2 Change of p H and SOD activity during fermen2tatio n采用微量邻苯三酚自氧化法83结果。结果表明 :发酵前 27 h ,品温迅速上升至最高温度 45 ℃,直至第 42 h 还在 40 ℃。与此 同时 ,酶活迅速上升达到 142 U / ml 。在