三种dna提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究-华北农学报.pdfVIP

华北农学报 ·２０１５，３０（３）：２００２０４ 三种ＤＮＡ提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究 １ １ ２ １ １ １ １ 冉　策 ，陈　柳 ，陆家兰 ，刘正坪 ，魏艳敏 ，赵晓燕 ，尚巧霞 （１．农业应用新技术北京市重点实验室，北京农学院 植物科学技术学院，北京　１０２２０６；２．北京农学院 教务处，北京　１０２２０６） 　　摘要：草莓成熟叶片中含有大量的多糖、蛋白质、多酚和色素等物质，影响高质量 ＤＮＡ的提取和下游 ＰＣＲ反应的 进行。为确定适用于 ＰＣＲ技术检测草莓镶脉病毒（Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｖｅｉｎｂａｎｄｉｎｇｖｉｒｕｓ，ＳＶＢＶ）的ＤＮＡ提取方法，从草莓叶片 中提取 ＤＮＡ后，对样品中的ＳＶＢＶ进行特异性的ＰＣＲ检测，比较确定不同ＤＮＡ提取方法对 ＰＣＲ检测 ＳＶＢＶ稳定性 的影响。以感染 ＳＶＢＶ的草莓叶片为材料，分别采用 ＣＴＡＢ试剂盒法、高盐低 ｐＨ法、改良ＳＤＳ法提取草莓叶片的总 ＤＮＡ，将不同方法提取的ＤＮＡ通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行测定，对 ＤＮＡ产量和质量进行分析。结 果表明，３种方法均能获得较为完整的ＤＮＡ片段，用 ＣＴＡＢ试剂盒提取的ＤＮＡ质量最高，改良ＳＤＳ法提取的ＤＮＡ质 量较低。将不同方法提取的ＤＮＡ经过 ＰＣＲ反应特异性检测 ＳＶＢＶ后，将与目的片段大小一致的ＰＣＲ扩增产物经序 列测定及分析，证明与 ＳＶＢＶ的序列相吻合，证明了方法的可靠性，其质量能够满足 ＰＣＲ特异性检测需要。 关键词：植物 ＤＮＡ提取；ＣＴＡＢ试剂盒；高盐低 ｐＨ法；ＳＤＳ法 ＋ 中图分类号：Ｓ４３２．４ １　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－７０９１（２０１５）０３－０２００－０５ ｄｏｉ：１０．７６６８／ｈｂｎｘｂ．２０１５．０３．０３４ ＳｔａｂｉｌｉｔｙＡｓｓａｙｏｆＴｈｒｅｅＤＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒ ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳｔｒａｗｂｅｒｒｙＶｅｉｎＢａｎｄｉｎｇＶｉｒｕｓ １ １ ２ １ １ ＲＡＮＣｅ，ＣＨＥＮＬｉｕ，ＬＵＪｉａｌａｎ，ＬＩＵＺｈｅｎｇｐｉｎｇ，ＷＥＩＹａｎｍｉｎ， １ １ ＺＨＡＯＸｉａｏｙａｎ，ＳＨＡＮＧＱｉａｏｘｉａ （１．ＢｅｉｊｉｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｗＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２２０６，Ｃｈｉｎａ；２．ＯｆｆｉｃｅｏｆＡｃａｄｅｍｉｃＡｆｆａｉｒｓ， ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２２０６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＤｉｆｆｅｒｅｎｔＤＮＡｉｓｏｌａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｕｓｅｄｉｎｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｄｕｅｔｏｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏ ｌｉｔｅｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅｅｘｉｓｔｉｎｇｏｆｌａｒｇｅａｍｏｕｎｔｓｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓａｎｄｐｉｇｍｅｎｔｓ ｉｎｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｐｌａｎｔｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈｑｕａｌｉｔｙＤＮＡｆｒｏｍｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｌｅａｖｅｓａｎｄａｆｔｅｒｗａｒｄｓＰＣＲｒｅａｃ ｔｉｏｎ．ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗｈｉｃｈｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｈｅＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｖｅｉｎｂａｎ