利用四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠的技术方法利用四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠的技术方法.pdf

第37卷第6期 解 剖 学 报 V01．37．No．6 2006年12月 ACTAANATOMICASINICA Dec．2006 ·综述· 利用四倍体胚胎补偿法制备ES小鼠的技术方法 oFPRoDUCINGMICEDERⅣEDFROMEM吣RYoNICSTEM TECHNIQUE CELLSBYTETRAPLoIDEMBRYoCoⅣⅡ’LEⅣ【ENTATIoN 李相运” 周荣艳 (河北农业大学动物科技学院，保定071001) [摘要] 目的介绍四倍体胚胎补偿法制备Es小鼠技术的操作环节，加快该技术的推广应用。 方法综 合分析近几年来国内外在小鼠四倍体胚胎与Es细胞嵌合的研究成果，并结合我们自己的实验结果，分析影响Es 小鼠制备的各种因素。 结果 四倍体胚胎不能正常发育至妊娠期末，通过四倍体胚胎与胚胎干(ES)细胞的嵌合 可以得到完全由Es细胞发育而来的小鼠，即Es小鼠。同核移植小鼠相比，ES小鼠具有正常的形态、生理和神经特 征。Es细胞和四倍体胚胎的遗传背景、ES细胞的生长状态、嵌合方法、培养基种类、体外培养环境、移植方法、继母 母性等是影响Es小鼠生活力的重要因素。 结论 利用四倍体胚胎补偿法可以简便而快速地从遗传修饰的Es 细胞获得突变体小鼠，为研究基因功能和构建人类疾病动物模型提供了一条有效途径。 [关键词】胚胎干细胞；四倍体胚胎；电融合；聚合；小鼠 [中图分类号】Q132．8[文献标识码]A[文章编号]0529—1356(2006)06．724 小鼠是最为常用的实验动物，也是主要的人类疾病模型 中，四倍体胚胎只参与胚外组织的生成n。]。四倍体细胞与 动物，而且，小鼠胚胎干细胞(Es)的分离建系方法最为成熟。二倍体细胞在嵌合体小鼠组织中的严重偏离分布现象已被 胚胎干细胞是一种高度未分化的多能性细胞，具有长期自我 生物学家应用于许多实验，以挽救胚外组织的发育缺陷、划 增殖、自我更新和多向分化的潜能，能够再生出各种功能细 分遗传不相似组织、快速获得基因突变小鼠以及分析突变基 胞和组织器官，已成为现代生命科学领域中最前沿、最热门 因的表型。如果将ES细胞与四倍体胚胎嵌合，使二者的发 的研究课题。通过小鼠Es细胞与四倍体胚胎聚合技术可以 育潜能互相补偿，就有可能得到完全由ES细胞发育而来的 简便而快速地从经过遗传修饰的小鼠Es细胞中获得完全由 个体，其胚外组织则由四倍体胚胎生成，这种技术被称为四 Es细胞发育而来的个体，即ES小鼠，为研究人类基因功能倍体胚胎补偿技术(tetraploidembryo 和构建疾病动物模型提供了一条有效途径。虽然制备ES小 鼠的技术早在1990年就已经出现…，但至今为止，该技术还 没有在国内和国外实验室得到普及和推广，很可能是因为这 等b’7’副利用杂交遗传背景的Es细胞高效获得有生殖能力的 一技术涉及的操作环节较多，且每一环节的成败都直接影响 成年Es小鼠，并发现小鼠Es细胞遗传背景的杂合程度是影 着ES小鼠的获得。本文简要介绍四倍体胚胎补偿技术及其 响Es小鼠生活力的关键因素。国内，我们研究小组在2004 基本操作步骤、Es小鼠组织嵌合度分析方法以及Es小鼠的年3月利用四倍体胚胎补偿技术也获得了Es小鼠【9j。在小 应用前景，重点综述影响Es小鼠制备的诸多因素，如Es细 鼠中，这种技术比克隆技术效率高且更有优势，在出生重、胎 胞的遗传背景、Es细胞的传代次数和冷冻、Es细胞的生长状盘重、生理生化指标等方面，Es小鼠比克隆小鼠更趋于正 态、四倍体胚的制作方法、四倍体胚的遗传背景、四倍体胚与 常]。利用该技术可以简便而快速地从基因打靶的杂种Es Es细胞的嵌合方式、假孕母鼠的母性和分娩方式、聚合胚移 细胞中获得完全由Es细胞发育而来的个体，为人类功能基 植方式、聚合培养基等，目的在于使该技术尽快在我国得到 因组研究提供了一条有效途径。若将四倍体胚胎补偿技术 实际应用。 与