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布鲁克液质联用仪操作规程1操作前检查1.1 检查液氮罐和高纯氮的出口压力，保证在正常范围1.2检查洗针溶液和流动相1.3 流动相须现配并超声，缓冲盐溶液过0.22μm微孔滤膜（或者使用色谱纯的盐溶液和酸溶液）1.4 如使用溶融石英进样管，操作前应检查石英管是否拉长，确保其未超出ESI探针尖端。1.5 检查系统真空度，电离真空计读数（分析仪区域）应小于5×10-6 Torr。1.6 检查废液液位，及时清空废液。1.7 检查液氮罐和氦气钢瓶是否有一定压力，以便为测试样品提供符合流速 和压力要求的氮气（喷雾气体和干燥气体）和氦气（碰撞气体）。2操作步骤及注意事项1．检查并打开干燥气 (Dry gas) 和雾化气 (Nebulizer Gas)所需的氮气源；1) 如配备液氮罐，则需打开增压阀及供气阀阀门， 使罐体压力保持在100 psi 以上，并调节减压阀出气口压力至 0.6 Mpa；2) 如配备氮气发生器，则提前半小时打开氮气发生器电源，以便使氮气能够达到99.99%以上的纯度，再调节氮气流量至 20 L/min；2．检查并打开碰撞气 (Collision Gas) 高纯氮气N2或高纯氩气Ar钢瓶（纯度要求99.999%），并调节减压阀出气口压力至 0.4 Mpa；3．检查机械泵泵油的水平线， 需在小窗口的 1/2～2/3 之间；4．打开计算机，显示器电源；5．打开质谱仪主机电源（仪器左侧最下方）；6．启动 micrOTOFcontrol 控制软件，务必保持仪器一直处在shutdown状态，待真空度达到 ≤1×10e-6mbar后，才可切换至standby状态待机；为了保证良好稳定的实验结果，待真空度下降至 10e-7mbar以下后，再operate仪器开始测试。2.2 新建液相方法打开hystar软件，选择method，然后输入新建方法的名字，点击open，开始方法的新建。在弹出的对话框中选择edit，然后点击“wizard”进行设置。液相方法包括梯度、流速、柱温、样品盘温度、时间、进样针吸样速度等，可依次设置即可，全部设置好之后，将。2.3 新建质谱方法方法一：在otofcontrol中，打开method，按照自己待检测物的分子量范围及正负偏向性选择合适的质谱方法，小分子有对应的small molecular方法，蛋白质组有专门的proteomics方法。方法二（非专业人员不推荐）：在otofcontrol中，打开method，选择new，即可新建质谱方法。可以修改的参数包括以下几个方面：（1）mode中的Focus为active，line spectra calculation为use sum intensity，ion polarity 为pos或neg，mass range调到待检测物合适的分子量范围。（2）source中capillary pos：4500V，neg：3500。Divert valve：source1-2进质谱；source1-6为discard to fluid（3）Tune中collision RF 小分子调到1000-1500，大分子调到2000-2500；low mass视目标物分子量大小截留（例如目标分子为500，可调为300，去掉小分子区域的杂峰）。（4）MS/MS中如果想检测二级，可以勾选auto MS/MS；precursor ions中 cycle time 正常下为3s（5）chromatogram中选择BPC根据待检测物的分子量大小和正负偏向性，先在软件自带的质谱方法中选择相应的方法，再在此方法的基础上进行优化及分段（如含盐的样品截掉前2-5分钟，1-6 waste）。仪器在操作状态下Operation 稳定 20-30 分钟后即可开始仪器质量准确度校正。2.4仪器质量准确度校正2.2.1. 药物和酶解多肽样品，选用甲酸钠溶液作为校正标准液。覆盖质量范围m/z 90-1200；校正模式选用 Enhanced Quadratic。2.2.2. 蛋白质类样品选用三氟乙酸钠溶液作为校正标准液。覆盖质量范围m/z 200-2000；校正模式选用 Quadratic。2.2.3. 校正液配制甲酸钠校正液：溶剂：异丙醇:水溶液= 1:1 并含有 0.2%甲酸10mM 甲酸钠校正液： 1ml 1M NaOH + 99ml 溶剂三氟乙酸钠校正液：溶剂： 50%乙氰含有 0.1%三氟乙酸钠(TFA)2.2.3. Calibration 校正界面3.测样方式3.1 直接进样测定对于标准品或相对较纯或混合组分较少并且不含盐的药物样品， 如果仅需要进行鉴定，可以采用直接进样方法测定。3.1.1 样品用标准溶剂（50%H2O，50%乙腈或甲醇，0.1%甲酸）溶解或稀释3.1.2 将配好的样品或标准品吸入进样器