大血藤水提物对大鼠卵巢雌孕激素受体的影响.docVIP

精品论文 参考文献 大血藤水提物对大鼠卵巢雌孕激素受体的影响 夏瑶宾1 赫银再2 刘彦恒2（通讯作者） 　　【摘 要】 目的 观察大血藤对大鼠血清中雌二醇（E2）和孕酮（P）含量以及大鼠卵巢组织中雌激素受体（ERalpha;、ERbeta;）、孕激素受体（PR）的表达水平的影响。方法 将雌性 wistar大鼠 50只随机平均分为5组：正常组、大血藤高、中、低剂量组（47,235，470 mg.Kg-1）、三苯氧胺组。灌胃给药，连续21d。结果 与三苯氧胺组和正常对照组相比大血藤各剂量组大鼠卵巢细胞中ERalpha;表达水平明显升高, ERbeta;表达水平明显下降（P＜0.05）；卵巢重量与正常组相似，明显高于三苯氧胺组（P＜0.01）。与三苯氧胺组比较，大血藤各组PR 的阳性细胞表达值升高，有统计学意义（P＜0.01）。结论 大血藤水提物明显上调ERalpha;表达，下调ERbeta;表达，不影响卵巢重量。 　　【关键词】 大血藤； 植物雌激素样效应； 卵巢； 雌激素受体、孕激素受体 　　大血藤为木通科植物大血藤 Sargentodoxe cuneata(Oliv) Rehd.et Wils的干燥藤茎[1]。功能主治痛经、闭经[2],临床用于治疗经闭、痛经、月经不调、崩漏[3]、子宫内膜异位症、炎性继发性不孕症等[4]，并具有抗肿瘤［4］、免疫抑制[3]等多种药理活性。多年来大血藤及其复方用于妇科临床，提示大血藤可能通过调控雌激素信号通路，影响雌孕激素水平和受体表达等途径，而实现治疗作用的。本研究采用成年雌性大鼠为研究对象，通过观察外周雌孕激素水平，卵巢系数、及其雌孕激素受体光密度值，初步探讨大血藤用于妇科临床的药理学依据。为临床应用提供依据。 　　材料与方法 　　1．药品及试剂 大血藤药材由安徽源和堂药业股份有限公司提供，经内蒙古食品药品检验所鉴定均为纯正药材。批号样品制备：用3倍量95%乙醇回流提取2次,每次1.5h,提取后的药渣再用3倍量的水煎煮2次,每次1.5h,合并2次乙醇提取液和水煎液,分别减压浓缩真空干燥即得醇提物和水提物（以水提物为试验药品）。枸橼酸他莫西芬片（三苯氧胺），扬子江药业集团有限公司，10 mg/ 片，60 片 /盒，产品批号以上各药以 60 kg 人为标准，按照体重换算法计算给药剂量。孕酮（p）：批号雌二醇(E2)批号一抗：雌激素受体alpha;（ERalpha; ），英国Abcam公司，货号：ab32063；雌激素受体beta;（ERbeta;），英国Abcam公司，货号：ab3576；PR抗体，英国Abcam公司，货号：ab131486；二抗：上海长岛生物技术有限公司产品。多聚赖氨酸，北京中杉金桥生物技术有限公司，批号：ZLI- 9006。 　　2．仪器 IMS图象分析系统:摄像机PANASONIC ,型号:MV-CP410;显微镜, 型号:OLYMPUS BH2,数码相机,型号:NIKON,基尔顿生物科技（上海）有限公司 ；Haiher 超低温冰箱，中国制造；Leica RM2235石蜡切片机，北京众力挽生物科技有限公司；LeicaHI1220水平干式烘干仪，北京众力挽生物科技有限公司；JY3002 电子天平，上海精密科学仪器有限公司；隔水式恒温培养箱，上海精宏实验设备有限公司；800 型离心沉淀器，上海手术器械厂；酶标仪，芬兰（Labsystems Multiskan MS）公司；洗板机，芬兰（Thermo Labsystems）公司。移液器，吉尔森P型移液器(Pipetman)。其他所需耗材均为国产。 　　3．动物 成年wistar大鼠 ，雌性，体重190.4plusmn;12.1g，50 只，8～9 周龄，内蒙古大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（蒙）2014-0020。 　　4．分组 适应性饲养一周后，按完全随机分组，设正常组、三苯氧胺组(0.33mg.kg-1)、己烯雌酚组(8.3times;103mg.kg-1)、大血藤低剂量组、大血藤高剂量组(47,470mg.kg-1，分别相当大血藤生药量的2.5, 25g.kg-1,为成人剂量的10，100倍)，每组 10只。 　　5．给药前 5 d 起查阴道脱落细胞涂片，每日一次，判断大鼠性周期。于分泌期开始给药，给药结束前 5d 起查阴道脱落细胞涂片至给药结束。给药期间每 5d 称一次体重。给药剂量以 60 kg人每日量为标准。每天灌胃给药，连续21 d。 　　6．血清E2、P水平的检测 于末次给药后第一天。腹腔内注射20% 乌拉坦麻醉大鼠，腹主动脉采血，静置 20min后，2000r.min,分离血清，置于冰箱