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绒山羊精子检测方法简介 杨文凯 辽宁省家畜家禽遗传资源保存利用中心 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 收稿日期：2017-09-06 Received： 2017-09-06 精液采集后应立即对其品质进行全面检查, 为精液处理及使用提供参考依据。检查的内容包括:颜色、射精量、活力、密度、畸形精子率、顶体完整率、存活时间等。 1 射精量 可直接用注射器吸取测量, 测量时将针头尖部磨平, 以使集精杯中的精液全部吸入注射器内, 排出气泡, 读取数值即可。也可以采用称重法测量射精量。 2 活力 可分目测法和仪器测定法两种。 2.1 目测法 用200~600倍的光学显微镜, 观察视野中直线运动的精子数占总精子数的百分比。例如视野中有60%的精子直线运动, 即活力为0.6, 其它依此类推。肉眼目测活力存在一定的误差, 但是只要人员相对固定、测定数量较多形成经验后, 准确性会明显提高。并且目测法具有测定速度较快, 比较适合人工授精现场操作和大批量生产冻精的要求。为确保测定的准确性, 可以定期将目测结果与仪器测定结果进行比对。 2.2 仪器测量法 精液样品制成平板压片, 即在载玻片上滴一滴精液, 盖上载玻片即可, 放在37~38℃显微镜恒温载物台上或有保温箱的显微镜下观察。可用平板压片法在200~400倍恒温显微镜下观察精子的运动状态, 然后进行统计。 3 密度 3.1 目测法 在300~600倍显微镜下进行观察, 分为密、中、稀三个等级。密, 视野中精子很多, 精子间的空隙不足容纳一个精子, 很难看出单个精子的活动情况;中, 视野中精子间有容纳1~2个精子的空隙;稀, 视野中精子之间的空隙超过两个精子以上。 3.2 计数板计数法 工具为红细胞计数计, 由吸管、软橡胶连管、计数室、盖玻片等组成。因为原精中精子密度很高, 不便计数, 因而取少量精液稀释若干倍, 再放入一定容积的计数室内进行查数, 最后换算成1 m L精液中含有的精子数。应用红细胞吸管取精液至0.5 (稀释200倍) 或1.0 (稀释100倍) 刻度, 再吸取3%氯化钠溶液至101刻度, 以拇指和食指分别按住吸管两端, 振荡, 使精液与3%氯化钠溶液充分混匀, 弃去数滴, 吸管尖端放在计数板和盖玻片之间的空隙边缘使稀释的精液流入计算室, 进行计数。计数板上的两个计数室被划成25个大方格, 内由400个小方格组成, 25个大方格的面积为1 mm×1 mm=1 mm, 计算5个大方格内的精子数, 即可计算出1 m L精液中含有的精子数。为了计算具有代表性, 可以选择四角四个大方格及中央的一个大方格或者处于对角线上的5个大方格。计算室的划分情况如图1。 图1 计算室划分情况 ??下载原图 5个大方格中的精子数×5等于计算室内25个大方格中的精子数, 再乘10则换算成1立方毫米容积内的精子数, 再乘1000, 则换算为1 m L精液中含有的精子数, 因为总的稀释倍数为200倍, 所以1 m L原精中含有的精子数为上数乘积再乘200, 即原精密度=0.1亿×5个大方格中的精子数。 3.3 精子密度仪测定法 主要根据不同精子密度的透光性原理, 取少量精液进行比色分析, 操作按仪器说明书进行即可, 一般在2 min左右即可测定完成一只公羊的精子密度, 主要用于冻精生产及实验室精子密度的测定。 4 存活时间 精子存活时间是指在一定条件下的总生存时间。方法为每1~2 h观察精子的活动状态, 直至精子全部死亡, 记录精子存活时间。存活时间越长, 精子的受精能力越强, 反之越差。 5 存活指数 精子存活指数是指精液内精子平均存活时间, 即精液内精子活力下降的速度。具体方法是由第1次检查时间到倒数第2次检查之间的间隔时间, 加上最后一次与倒数第2次时间的一半, 其总和时间即为精子存活时间。每相邻前后两次检查的精子平均活率与其间隔时间的乘积相加的总和即为精子存活指数。精子存活指数越长, 精子的受精能力越强, 反之越差。 6 精子畸形率和顶体完整率 畸形精子的检查, 可在计数死活精子数的同时进行, 也可将精液制成抹片直接在显微镜下观察, 或用普通染色液 (美蓝) 或红蓝墨水染色, 水洗干燥后镜检。检查的精子数不得少于200个, 计算畸形百分比, 即畸形率。 精子畸形包括:单身双头精子、单头双身精子、尾部折断精子、尾部弯曲精子、无头精子、无身精子、顶体脱落精子、顶体破裂精子、顶体膨大精子、有原生质滴精子、小头精子等。精子顶体完整率与畸形率的具体测定方法如下: 用精子快速染色液染色, 取少量稀释精液抹片, 用95%乙醇铺满载玻片固定2~3 min, 空气中自然晾干, 干透后水合1~2 min