5AzaCdR对Hs888T骨肉瘤细胞增殖、凋亡及APAF1基因表达的影响研究.pdfVIP

中国医科大学研 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：触赴日期：乙幺丛／7 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规忌即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 三跏、谚 日 前一言………………………………………………………………………………”／ 刖舌……………………………………………………………………………… 实验材料与方法…………………………………………………………………8 实验结果…………………………………………………………………………lO 讨论………………………………………………………………………………11 结论………………………………………………………………………………13 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………14 五、参考文献…………………………………………………………………………15 六、附录 综j盎……………………………………………?………………………………一16 在学期间科研成绩………………………………………………………………23 致谢………………………………………………………………………………24 个人简介…………………………………………………………………………25 ·中文论文摘要· APAF．1基因表达的影响 目 的 骨肉瘤是一种常见的恶性骨肿瘤，好发于青少年，恶性程度高，进展迅速， 然而骨肉瘤的发病机制尚未清楚。表观遗传学中DNA甲基化介导的基因沉默是肿 瘤中常见的基因变异。APAF-1基因位于染色体12q23，是在线粒体凋亡途径中p53 下游的关键成分，是凋亡的核心。在多种肿瘤和细胞系中发现了APAF．1基因甲 甲基化。本实验拟检测DNA甲基转移酶抑制剂5．氮杂．27脱氧胞苷(5．Aza．CdR) 处理前后骨肉瘤细胞Hs888T的细胞增殖、周期及Apaf-1蛋白表达水平变化，探 讨5-Aza．CdR在骨肉瘤发生、发展的作用及机制。 方法 l、主要试剂 Cruz公司。 2、细胞培养及药物处理 and0．3mmol／L) 空气培养箱中。培养24小时候后用不同浓度的5-Aza．CdR(0、0．1 处理48h、96h后收集细胞进行实验。 3、四唑盐(MTT)比色法检测Hs888T增殖活性 取对数生长期的细胞，按1x103／1009l细胞接种于96孔板中，每孔加入细胞 悬液2001．tL。实验组和对照组分别设6个复孔。分别培养44h、92h后倾去培养基， 各孔加入59in的MTT201ttL继续培养4h。选择570nm波长，在酶标仪上测定各 孔光吸收值(A)。 4、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡水平 oc固定过夜，RNaseA37℃孵育30min后， 收集处理的各组细胞，70％冰乙醇4 及细胞凋亡率。