农药学实习指导书.docVIP

2011年《农药学原理》实验和实习内容 教师：尹显慧 时间：2011.6.27——2011.7.1 地点：实验室 班级：09植保 人数：46人 分组：8组 6.27 番茄青枯病活化培养 6.28 番茄青枯病室内防治药剂筛选 6.29 敌百虫定量分析 波尔多液的配制及质量检查 6.30 除草剂的选择作用及防除效果 农药稀释法 7.1 农药物理性状的测定 实习：番茄青枯病菌接种 1. 首先，将保存的青枯菌移出活化并在TTC平板上检测其致病力，然后于NA平板上扩大培养备用。 牛肉膏蛋白胨（NA）固体培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15-20g，水1000ml。Ph.2-7.4。0.1mpa、120℃，灭菌30分钟。 NA液体培养基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，水1000ml。Ph7.2-7.4。0.1mpa、120℃，灭菌30分钟。 3.无菌操作接种时由于有一个敞口的过程,所以是极易引起污染的时期,这一时期主要由空气中的细菌和工作人员本身引起,接种室要严格进行空间消毒.无菌操作可按以下步骤进行: (1)在接种前20min,打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯;(2)接种员先洗净双手, 上工作台后,用酒精棉球擦拭双手,特别是指甲处.然后擦拭工作台面;(3) 先用酒精棉球擦拭接种工具,再将镊子和剪子从头至尾过火一遍,然后反复过火尖端处,对培养皿要过火烤干(4); 接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话,走动和咳嗽等;(5) 接种完毕后要清理干净工作台,可用紫外灯灭菌30min. 将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。 平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入，倾入10~15mL培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。 5. 接种 等培养皿降温后,操作人员酒精消毒后,在火旁进行接种, 茄青枯雷尔氏菌划线于固体NA培养基平板上，置于30℃培养箱中培养2d。. 实习：番茄青枯病室内防治药剂筛选 番茄青枯病是由茄青枯菌(Ralstonia solanacearum)引起的土传性病害。它广泛分布于热带、亚热带及温带地区，是番茄上的毁灭性病害。在我国的长江流域及其以南地区如广东、浙江、福建、江苏、湖北、四川、贵州、重庆等各省市均有严重发生，给我国的番茄生产造成巨大的损失。由于目前对番茄青枯病的防治仍缺乏有效的药剂，因此本试验通过室内抑菌试验，探讨中生菌素和农用链霉素对番茄青枯病防治作用。 的防治作用。 1.1 供试材料 1.1.1 供试药剂 72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂 北京中农弘露科技发展有限公司 3%中生菌素可湿性粉剂 东莞市瑞德丰生物科技有限公司 沙星达隆有限公司 80%代森锰锌WP 先正达 50%喹啉铜WP 浙江海正化工股份有限公司 0.5%氨基寡糖水剂 贵州道元生物技术有限公司 1.5%金霉唑（噻霉酮）水乳剂 陕西西大华特科技实业有限公司 1.1.2 目标病原 番茄青枯菌从修文和独山县番茄青枯病重发田采样分获，经致病性测定。保存于4℃冰箱。 1.2 试验方法 杀菌剂对番茄疮痂病菌的抑制作用测定（圆形滤纸片法） 番茄疮痂病菌单菌落 挑出单个菌落在无菌水中，室温可保存3-6个月 取5ml+液体NA培养基45ml,震荡1天 用接种环取一环+40mlNA液体培养基，摇匀4小时后成108左右 取2ml+18mlNA含琼脂的固体培养基混匀 凝固，滤纸打成5mm直径圆片，浸药液 1个培养皿放2个滤纸片，一个处理重复3次，在28℃的培养箱中培养12h后观察抑菌圈的大小，出现抑菌圈后马上测量，然后每12h测量1次，直到抑菌圈不再扩大为止。 药液配制：灭菌水把每种药剂配制成如表1.所示不同浓度药剂，灭菌，将滤纸剪成5mm的圆形小纸片，待用。 抑菌试验操作步骤：药剂浓度设置见表，抑菌作用采用圆形滤纸片测定，把配制好浓度的细菌悬浮液，置于超净工作台上，取适量放于培养皿，将培养基倒入培养皿内与菌液摇匀，待培养基凝固后，把经不同浓度药剂浸泡的5mm大小灭菌滤纸片等距放于培养基上，在25～28 ℃恒温箱中培养后，观