人源性抗HBsAg抗体Fab片段对人肝癌细胞系细胞的作用研究.pdfVIP

人源性抗HBsAg抗体Fab片段对人肝癌细胞系细胞的作用 人源性抗HBsAg抗体Fab片段 对人肝癌细胞系细胞的作用 罗荣城龚新雷丁雪梅 (第一军医大学南方医院肿瘤科510515) 摘要：目的：探讨基因工程技术制备的人潭性抗t-msAg单克隆抗体Fab片段单独度在其它 细胞因子的协同作用下对表迭Zt．．g表达眦＆沁的两种人肝癌钿胞汞HepG2厦a8r,G2．2．15细胞生 长的影响情况。方法：用基因工程技术制备的人潭性抗}丑h^g单克隆抗体F铀片较分组单独或与 软琼脂克隆形成试验和mT比邑法，记录细胞克隆形成数和OT值，通过速两种相关性较好的方法 采观掌其对两种肝癌细胞生长的影响情况。结果：1．软琼脂克隆形成试验：对于不表迭HBsAg的 HeoG2细胞．Fah组与对照姐的细胞克隆形成敷无明显差别，P值太于0．05：对于表连HIhAs的 H印G2．2．15细胞，F曲组细胞克隆形成敷比对J穰组低，F曲+Ⅱ一2组的细胞克隆形成敷比Fab组低， Fab组低。P值均小于0．05。结论：基因工程技术制备的人源性抗HasAg单克隆抗体片段(即胁) 2 15细胞的生长有明星的押制作用；共同使用Ⅱ一2和a— 时表达HltsAg的人肝癌细胞乐‰pc2 FN可咀增强Fab对表迭HBsAg的人肝癌细胞系rtep62．2．15细胞的生长的抑制作用。 关■词：肝如胞肝癌 乙型肝是表面抗原 FabHepG2．2．15细胞软琼脂克隆形成试验 ^f丌比色法 原发性肝细胞肝癌(HCC)是最常见的肝脏原发恶性肿瘤之一，世界范围内多发，全球年发 病率和死亡率高达50。100万人，是一种严重威胁人类生命和健康的恶性肿瘤。在HCC的病 因研究中，比较确定的一个危险因素是己型肝炎病毒(HBV)的感染。在我国，HBV在人群中感 染率很高，携带者高达成10％，由此造成慢性乙型病毒性肝炎在我国发病率极高_Ij。慢性乙 型肝炎病毒长期感染是HCC的重要发病因素，但其具体机制仍不清楚，很多证据表明乙型肝 炎表面抗原与HCC的发生有密切关系。大约1／3的乙型肝炎相关的HCC在癌细胞表面表达 虑做为免疫治疗的一个有效的靶目标。 随着抗体制备技术进入发展到基因工程抗体技术，针对乙型病毒性肝炎的抗体的研究也 取得了突飞猛进的进展，从对鼠源性单抗的改造发展到采用抗体库技术筛选获得完全人源化 的单抗片段。我国学者陈竞华、王琰、韩焕兴于1995～1996年期间先后采用抗体库技术，成功 制备和纯化了具备良好生物活性的人源抗|ⅡkAg—Fab片段【3]，为其进一步的l临床应用打下了 良好的基础。抗HBsAg—F曲片段应用于肝癌的放免治疗已取得较为满意的效果．但其本身有 无直接抗癌作用尚无研究。 转染2拷贝HBV后称为H印G2．2．15细胞【5J，可以表达HBsAg。 ·253- 第二届广东青年科学家论坛论文集 本实验就是用基因工程技术制备的人源性抗HBsAg单克隆抗体Fab片段(以下简称蹦．) 脂克隆培养形成试验及四唑盐(Ⅶrr)比色法观察其单独及在其他细胞因子的协同作j月下对肝 癌细胞的生长的影响情况，为临床上伴有长期慢性H8、，感染的HCC患者的生物治疗提供 种新的可能有效的生物制剂。 1材料 1 1细胞 Hepc2细胞和HepG2．2．15细胞均为我科实验室长期保存的细胞株。 1．2主要试剂 抗HBsAg—Fab片段由第二军医大学全军临床免疫中心提供。DMEM和胎牛血清分别由 GIBCOBRL公司和GENE公司购人。琼脂为汕头达濠精细化学品公司产品：IL一2和a—IFN 由南方医院生物治疗中心提供。I岍Tr从SIGMA公司购入。DMSO(分析纯)为广州市南方化玻 公司产品。 1．3主要仪器和设备 仪(上海长扛生物仪器试剂公司)，24孔培养板(EVERGREENSCIENTIFIC公司)，96孔培养板 (FLOWI^BORA田ut口醛公司)。 2方法 2．1细胞准备 两种人肝癌细胞系HepG2细胞及HepG2．2．15细胞自液氨中取出后即复苏，以含10％胎 牛