乳腺疾病免疫组织化学染色的方法及意义.docVIP

精品论文 参考文献 乳腺疾病免疫组织化学染色的方法及意义 衣琳 王丽萍 　　（武警黑龙江省总队医院 黑龙江哈尔滨 150076） 　　【摘要】目的：探讨乳腺疾病的免疫组织化学染色的方法及临床意义。方法：对30例乳腺癌患者用免疫组织化学染色方法检测的方法及意义进行分析。结果：免疫细胞化学重复性、稳定性较好，有助于提高针吸细胞学的准确率，并可给临床提供有助于观察预后的良好指标。结论：免疫组织化学是已被广泛运用于肿瘤研究和诊断。免疫细胞化学则也在人们的实验摸索中逐渐被推广，其方法较易掌握，并且重复性、稳定性较好，有助于提高针吸细胞学的准确率，并可给临床提供有助于观察预后的良好指标。 　　【关键词】乳腺疾病；免疫组织化学染色；方法；意义 　　【中图分类号】R394 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）01-0055-02 　　近年来分子生物技术发展很快，常用于诊断细胞学中的技术有免疫组织化学、免疫细胞化学、PCR原位杂交技术和原位PCR。主要是肿瘤相关抗原，借以判断肿瘤的来源和分化程度，协助肿瘤的病理诊断和鉴别诊断，常用的染色方法有过氧化物酶-抗过氧化物酶法，即PAP法。现对30例乳腺癌患者免疫组织化学染色在乳腺恶性肿瘤诊断中的技术及运用分析如下。 　　1.资料与方法 　　1.1 标本 　　选取2014年6月～2015年6月收治的乳腺癌患者30例，术中做冷冻切片的乳腺肿瘤标本送病理科检测。 　　1.2 方法 　　常用的染色方法有过氧化物酶-抗过氧化物酶法，即PAP法。 　　1.2.1染色步骤 冷冻切片或石蜡切片均可。冷冻切片可用丙酮固定10min左右，石蜡切片需经脱蜡，各级乙醇至水。根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复[1]。每张切片加1滴或50?L过氧化酶阻断溶液，以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温孵育10min；或用0.3%的H202和80%甲醇液处理切片，室温30min。磷酸盐缓冲生理盐水(0.01mol/L，pH7.2～7.4)冲洗3times;5min。吸去PBS液，每张切片加1滴或50?L非免疫性动物血清，室温孵育10min，减少非特异生背景，不必冲洗，只需吸去多余的液体；或用5%正常羊血清处理切片，室温30min。PBS(0.01mol/L，pH7.2～7.4)冲洗3times;5min。每张切片加50mu;l非免疫性动物血清，室温孵育10min，减少非特异性背景，不必冲洗，只需吸去多余的液体；或用5%正常羊血清处理切片，室温30min。吸去血清，每张切片加1滴或501?L的第一抗体，室温孵育60min或37℃孵育45min或4℃孵育13～24h。PBS冲洗3times;5min。吸去PBS液，每张切片加l滴或50mu;L生物素标记的第二抗体(1：200左右)，室温孵育30min或37℃，孵育10min。PBS冲洗3times;5min。吸去PBS液，每张切片加50mu;L链霉菌抗生物素蛋白，过氧化物S-P溶液，室温孵育30min或37℃孵育10min。PBS冲洗3times;5min。吸去PBS液，每张切片加2滴或100mu;L新鲜配置的酶底物显色液DAB通常为0.05%DAB 0.03%H2O2液)或AEC)进行显色3-10min。蒸馏水或自来水冲洗。苏木素复染。根据不同显色系统选择相应的封片剂(中性树胶或水性封片剂)进行封片，观察。 　　1.2.2正确的判断结果 在做免疫细胞化学前，原涂片需进行常规染色，得出初步诊断意见，选定免疫细胞化学标记物及靶细胞，了解常规细胞涂片的细胞分布及形态特点。染色过程中，虽经阻断反应，但组织细胞中的内源性过氧化物酶，碱性磷酸酶或生物素等，可产生非特异性显色，镜下需能识别，防止误认为阳性细胞。阳性细胞的分布：涂片中阳性细胞可群集，也可散在，着色有深有浅，需注意的是有些正常的组织细胞易着色夹在肿瘤细胞之中，需鉴别。阳性细胞的标准：不同的标记物阳性颗粒分布的部位也不同，如Kerain、EMA、CEA分布于胞浆，PCNA、P21、P53、ER、PR等分布于细胞核，而LCA、CD20。则分布干细胞膜。 　　2.结果 　　ER 阳性16例(+7例，++6例，+++3例)，PR阳性23例(+13例，++8例，+++2例)，Her-2 阳性17例(+10例，++4例，+++3例)，P53阳性13例(+7例，++4例，+++2例)。免疫细胞化学重复性、稳定性较好，有助于提高针吸细胞学的准确率，并可给临床提供有助于观察预后的良好指标。 　　3.免疫组织化学染色意义 　　3.1 激素受体 　　（1）雌激素受体(ER)阳性乳腺癌称为雌激素依赖性乳腺癌。反之，瘤细胞只保留甚少甚或完