二甲双胍治疗PCOS 中的作用和机制的研究.docVIP

精品论文 参考文献 二甲双胍治疗PCOS 中的作用和机制的研究 1.首都医科大学石景山教学医院北京市石景山医院 北京 100043； 　　2.中国医学科学院北京协和医院 北京 100032； 　　3.首都医科大学石景山教学医院北京市石景山医院 北京 100043 　　【摘 要】目的：观察二甲双胍对多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠模型糖代谢、脂代谢、血清激素水平及小鼠卵巢组织肿瘤坏死因子TNF-alpha;的水平的影响，探讨其对PCOS大鼠的治疗机制。方法： 应用来脱氢表雄酮（DHEA）诱导的PCOS小鼠模型，选取20天大的雌性小鼠24只随机分为对照组、PCOS组、二甲双胍治疗组，每组8只。采用放射免疫法测定血清性激素睾酮（T）水平，光镜观察卵巢HE染色组织切片，血糖仪测定糖耐量．免疫化学法测定卵巢组织TNF—d的表达水平。结果：二甲双胍可明显降低小鼠血清的睾酮（T）的水平；使脱氢表雄酮（DHEA）诱变的卵巢组织的多囊化产生明显好转；降低小鼠血清中的TNF-alpha;水平；明显改善因多囊卵巢综合征(PCOS)引起的小鼠模型的糖、脂代谢异常。结论：二甲双胍能够通过影响PCOS模型的糖代谢、脂代谢、血清激素水平、组织学形态及组织肿瘤坏死因子TNF-alpha;的水平有效的治疗多囊卵巢综合征(PCOS)。 　　【关键词】多囊卵巢综合征；二甲双胍；肿瘤坏死因子TNF-alpha; 　　【中图分类号】R711 【文献标识码】B 【文章编号】1674-8999（2015）6-0100-02 　　多囊卵巢综合症（PCOS）在适孕女性的不孕不育症中大约占据了6%—8%[1]。根据Rotterdam的诊断标准，符合以下三条的中两条的就能定义为PCOS：1、临床或生化检测为高雄激素血症 ; 2、少发或无月经；3、通过超声检测发现为多囊卵巢[2]。由于伦理和可行性等原因，PCOS小鼠模型是我们研究PCOS相关问题的关键。Mahesh and Greenblatt [3]首先从PCOS患者的卵巢中分离出了脱氢表雄酮（DHEA），从此，DHEA诱导的PCOS小鼠模型的应用日益广泛。在临床胰岛素增敏剂，例如双胍类药物，成为治疗PCOS的最常用的药物之一。然而，其机制我们目前并不是十分的了解。我们主要是DHEA诱导的PCOS模型来研究二甲双胍的作用机制。肿瘤坏死因子(TNF-alpha;)在糖脂代谢中的作用日益受到关注，我们本实验的目的是为了探索二甲双胍是否是通过TNF-alpha;来改善PCOS患者的糖脂代谢紊乱。 　　1 材料和方法 　　1.1动物 　　C57BL/6J 野生型小鼠（华阜康生物技术有限公司，动物合格证号SCXK(京) 2009-0007），在20天大的24只小鼠按照体重和血糖水平进行随机分组。A组：正常对照组，皮下注射蓖麻油。B组：DHEA诱导的PCOS模型组，每天皮下注射DHEA(溶于蓖麻油，6mg/kg 体重，相当于临床PCOS患者的血清雄激素水平)，连续注射90天。C组：DHEA+二甲双胍组，每天皮下注射DHEA（6mg/kg体重），同时每天灌胃二甲双胍（500mg/kg 体重，相当于给一个临床治疗PCOS患者的用量），连续进行90天。 　　1.2 主要试剂 　　二甲双胍，中美上海施贵宝生产，批号 1303090，规格 0.5g； 　　蓖麻油 ,内蒙古威宇生物科技有限公司； 　　脱氢表雄酮 , 深圳市新产业生物医学工程有限公司，纯度ge;99.7%； 　　亚甲基蓝，江苏济川制药公司生产，批号 110507,规格 10ml:0.1g。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1卵巢的组织学分析 　　卵巢冰冻切片的HE染色用于组织学分析。冰冻切片的厚度为6um。主要过程为卵巢在4%的多聚甲醛固定4小时，30%蔗糖脱水8小时。OCT（冰冻切片的包埋剂，中杉金桥生物技术有限公司）包埋。 　　1.3.2 阴道涂片 　　在三组小鼠处理30天后做连续一周的阴道涂片，并用0.1%亚甲基蓝溶液染色。 　　1.3.3口服葡萄糖耐量试验是（OGTT） 　　在三组小鼠给予90天处理后，做OGTT实验，小鼠禁食6小时，灌胃3g/kg葡萄糖。检测0min,15min，30min，60min，90min，120min时刻的血糖水平。 　　1.3.4激素，脂质和细胞因子的测定 　　下腔静脉取全血，离心，取上清。在北京北方生物技术研究所测定小鼠的雄激素，y胰岛素和TNF-alpha;的水平。利用北京普利莱生物技术有限公司的胆固醇(CHO)，甘油三酯(TG)试剂盒测定小鼠的胆固醇和甘油三脂的水平。 　　1.3.5 统计学分析 　　由于实验均是分三组进行，所有的统计结果都是利用方差分析进行统计的，三组之间的两两比较是用LSD的统