POWERPOINT TEMPLATE - 2011全国分子细胞生物学实验技术培训班.ppt

临床科研设计与SCI论文策略之二 --分子细胞生物学篇 前节讲座回顾 临床研究目的基因筛查 本节讨论内容 科研选题及设计：以SCI为目的 课题新颖/数据量大 博览文献、去粕存精 它山之玉、可以攻石 文献阅读 研究内容在哪？ 研究内容在哪？ 我的研究内容在哪？ 我的研究内容在哪？ 研究内容在哪？ 研究内容在哪？ 课题设计： 文献阅读-工具 （Endnote） 案例 4xFigure Formula 6xFigure Formula 6xFigure Formula 技术路线 Planning Figures：4 x Figure Style 筛选临床研究新基因的方法 所见即所得—分子细胞生物学应用 理清思路 第一手资料：细胞来源 如何筛选研究对象 分子细胞生物学思考点 技术实现：条条大路通罗马 分子细胞生物学：细胞凋亡 Apoptosis：WB Assays Apoptosis：Fluorescence Assays 分子细胞生物学：细胞周期 初步定性 Make a Story! 机制研究切入点 Apoptosis：Inhibitors Apoptosis：Inducers 有计划有目的的批量检测 细胞周期调控 分子生物准备？ 外包繁琐的分子准备工作 科研准备 自成体系的实验方案 应用成熟实验技术：qPCR 应用成熟实验技术：Western Blot 应用成熟实验技术：免疫荧光 Make a Story! 漂亮的Figure2 Fluorescence: A Beautiful View Fluorescence: A Beautiful View Fluorescence: A Beautiful View Fluorescence: A Beautiful View 回顾案例 回顾文献 回顾文献 Make a Story! 上面说的，在大家看完文献之后，都会或多或少产生共鸣。但在漫长的选题过程中，老会这个感觉: 我的课题做死了！有时课题做到半途也有这个感觉！ 1. 结论已经发表 2. 推理已经证实 3. 技术已经应用 4. 实验无法实现 5. 时间不够用。 那怎么做？这个回到高考的时候老师教我们的：发散思维。往外拓展思维。 比如研究样本的差异也可以作为一种选题方式。 药物处理的差异可以应用到课题选择中。 还有利用机制的相似性。 信号通路上下游因子的选择。 家庭基因的选择。 一但形成自己的思维之后，我们又要把课题设计简单化。设计成一个简单、清楚、易懂的课题。 一旦把课题主线想好，我们就要开始探索啦。这里展示的是孙永林上次报告时教大家筛选研究的目的基因的方法。在未知道的情况下，通过芯片方式还是一个不错的选择的。但对于那些标记为ATCG，又有什么启动子呀，Kozaka系列之类的，确实让大多临床医生头疼！ 其实对临床研究来说，不要急着去筛选新的基因，即使筛选出新的基因或者miRNA，也是件很头脑的事情。为什么，因为都还没准备好研究的方向呢！这里我讲一方案呀，就是逆向研究。通过先前对文献的阅读，确定某些要研究的对象，先获取一个所见即所得的实验结果，然后再逆向研究基因呀，通路呀。 然后又返回到自己的临床样本上。这就是我今天要引入的分子细胞生物学手段。 现在我都尽量把名字写长点，分子细胞生物学。因为现在做细胞生物学的人一定在做分子，做分子的人也会做细胞。对于细胞，大家不要担心。有人担心我没养过细胞呀，也没细胞间。别着急，细胞无处不在。对我来说，我看一个细胞，就会去注意其形态，然后初步判断细胞的一些行为，如增殖、运动、骨架、凋亡、分化、衰老、自吞噬、分泌、粘连、饥饿。机遇是给有准备的人，在大脑中提前植入这些可能的性状。 实验用细胞来源很多，如临床组织也可以观察其细胞，能有原代培养细胞那更好做啦。还有，几乎每个研究领域都有自己的一些模式动物，如心脏病的老鼠模型呀，斑马鱼模型呀，还有我以用过诡异的非洲癞蛤蟆。 有条件的实验室还是常备一些细胞系。 拿到这些细胞之后，也不要求面面俱到地去分析呀。从这两个方面：1.细胞凋亡 2. 细胞周期 对于研究的对象，尽量能考虑到以下几点：独特性，这是你的实验所特长的、通用性，国际都公认的、而且自己以往的实验有些苗子提示的，当然，尽量要便于操作。不要拿一个细胞，看着好养，但你转染基因死活转不进去那就行啦。 这是一个比较经典的凋亡通路，即使教科书，大多内容是需要修改的，但这个通路好多年了，没人质疑，那我们就Follow它！体外刺激之后，会造成瀑布式的应激。FADD切割，Procaspase的成熟，然后会就会有所的线粒体依赖型及线粒体非依赖型的凋亡。这里大家记住几个关键因子，接下来我们会谈的： procaspases, Bax/Bak comformational change， 线粒体的崩解，以及cyt