应用间接血凝试验检测绵羊肺炎支原体血清抗体研究.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 年对从我国辽宁、河北、甘肃等地分离的羊肺炎支原体进行了完整的生化试验和生长抑制试验，但作者没 有高质量的各种支原体的抗血清．且生长抑制试验虽然比较简单而且特异性很好，但该方法也是最不敏感 的一种试验。且如果使用多克隆抗血清，交叉反应严重。所以我们主要在16srRNA序列方面进行了研究。 3．3由于16srRNA序列的种内高度保守而种间差异明显，因而可被用来鉴别支原体归属。本试验选择 16s rRNA全基因中700bp左右的片段用于支原体种间序列分析，与用全基因序列分析得出的结果基本一 致。所以可以选用对700bp片段的序列分析来对未知支原体进行分类鉴别。 3．4过去曾认为山羊支原体山羊肺亚种(M．ccp)是引起羊传染性胸膜肺炎的唯一病原，但实际上导致 羊支原体性肺炎的病原甚多，除支原体外，还有慢病毒感染、衣原体、细菌及病毒混合感染以及蠕虫、原 H¨J。我国在广泛免疫抗山羊肺炎支原体山羊肺炎亚种(M．ecp)的灭活疫苗Ⅸ1后，仍有山羊和绵羊的传染 性肺炎不断发生，原因就在于针对mecp的疫苗不能对绵羊肺炎支原体等其它我国存在的致病支原体产生 有效的免疫效果。这次分离到绵羊肺炎支原体，也证明了我国羊肺炎支原体的多样性。我们将进一步研 究对羊肺炎支原体的快速诊断，了解我国各类支原体的分布和流行状况，为更好的防治山羊和绵羊支原体 肺炎作出有针对性的预防与免疫措施。 参考文献略 应用间接血凝试验检测绵羊肺炎支原体血清抗体 屈勇刚l，陈宏伟1，魏鹏1，剡根强l，张再清1，路国林2，杨志军2 (1．石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003；2．石河子一五0兽医站) 的诊断抗原，通过IHA来检测绵羊支原体性肺炎血清抗体。发现致敏红细胞所用抗原的最佳浓度为 此种方法用于检测绵羊支原体性肺炎具有操作简单、可靠性强、费用低等特点，便于其推广和戍用。 关键词：绵羊；支原体性肺炎；间接血凝试验 绵羊传染性胸膜肺炎又称为绵羊支原体性肺炎。是以高度接触性传染，高死亡率、大面积的肺部肝样 变和胸膜炎为特征的传染病…，在亚洲、非洲以及其他养羊发达地区广泛流行口I。现在．在我国各养羊省 区均有本病流行，这对我国的畜牧业的发展构成日益严重的威胁”J。羊传染性胸膜肺炎是由两类支原体引 rRNA 建立的支原体亲缘进化树可以看出，这两类支原体的亲缘关系比较远口I，而且兰州兽医研究所的研究也证 实这两类支原体无交互免疫性。我国于1935年在内蒙古曾有流行山羊传染性胸膜肺炎的传说，其后在内 大力发展养羊业。不断引进和进行羊的扩群，给此病的流行创造了条件。因此不断完善检测方法提高检出 该病的感染率，对控制此病具有重要意义。 1试验材料 1．1茵种绵羊肺炎支原体Y-98冻干菌株购自中国兽药监察所。 1．2血清阴性血清为无支原体新生牛血清(购自三利生物制品厂)及经检测为阴性的绵羊血清；阳性血 1009 牛羊传染病 清由预防兽医学教研室提供；待检血清采自石河子市周边的141、150团场、新业羊场和石河子大学试验 站． 1．3绵羊支原体培养液的制备以牛心消化液为基础的培养液常用于支原体的培养。牛心消化液1000mI， 培养过夜后无杂菌生长时即可使用。制备完成的支原体培养基在培养前还应加入O．4％的酚红溶液0．5ml， 通过颜色和PH值的变化确定支原体的生长情况。 2试验方法 箱中培养，每隔8h观察一次．待培养基颜色变浅，PH值下降至6+9左右后．传代培养。其中的2～5代的 一部分可以留作种用，一部分扩大培养用于制作支原体抗原。 2．2支原体染色观察将Mo生长期培养物涂片，自然干燥，用酒精灯火焰固定后，滴加O．4％碱性复红染 液，同时滴加等量蒸馏水与染液混匀，染色1～2min，自来水冲洗．干燥后镜检。 3次后，制成1／100的浓缩抗原，经紫外分光光度法及计算所得菌体蛋白浓度。 2．4抗原的制备将浓缩的菌体悬液与一定量的稀释液混匀后，用超声波细胞粉碎机处理10min即成所需 抗原，冰冻保存。 2．5绵羊红细胞的制备无菌采取健康绵羊的颈静脉血液与等量的抗凝液充分混匀，置4℃冰箱中稳定 3