应用杆状病毒载体在昆虫细胞表达马立克氏病病毒Mep基因研究.pdfVIP

主垦查笪墨壁生垒查璺芏坌童蔓±壅芏苎量笪量堡塞塞 应用杆状病毒载体在昆虫细胞表达马立克氏病 病毒Meq基因 韦 平 (广西大学动物科技学院，广西．南宁市．530005) Lansillg．3606) Lucy}。．Lee(禽病与肿瘤研究所，美国M1ch垃an．Ea5t ， p GA株的 ■蔓本研究应用扦状病毒／昆虫细胞系统来表达马立克氏病病毒(MDV)Moq基因．旧e于MDV Bac—N．BlueTM DNA共转染于昆虫细胞系sF9．获得了重组杆状病毒潍用重组痘病毒表达的Meq制备的单抗对 BIotting和免疫沉淀试验的检测， 重组杆状病毒感染的sF9细胞及其裂解物分别进行间接免疫荧光试验、western 结果发现tO车表达系统产生的Meq可被原制备的单抗所识别l盛、在感染细胞中，Meq蛋白仅局限于细胞桉内，而 重组杆状病毒感染细胞的裂解物中出现有两条特异带(60kD处)。本研究的结果证明扦状病毒／昆虫细胞系统用于 表达外源蛋白是可行有效的。 、， ， 关■词马立克氏病病毒∽eq】杆状病毒I昆虫细胞照坑i转染／重组基因表达 、 ^ 一 马立克氏病(MD)是目前养禽业最重要的疾病之一。它是由疱疹病毒科的马立克氏病病毒 (MDv)所引起的一种恶性T淋巴细胞肿瘤。在人类的许多肿瘤发生中，由于基因的扩增而导致致 瘤基因(。ncogem)的过度表达是一种主要的机制。由于MDV感染后的短暂潜伏状态和肿瘤迅速 形成的特征，使我们认为MDV自身可能编码有效的致瘤基因。但具体是哪／卜基因，目前尚未得到 D、 确定。对MD肿檀细胞的研究表明，MDv基因组中得到表达的区域局限在长重复区的BamHI Meq口!。132_bpr的拷贝数与MDv株的致弱程度有关，毒力株有很少的拷贝，而致弱抹则有多个拷 EcoRI 贝…”。pp38蛋白可引起鸡的免疫抑制o：。Meq(Marek’sQ)编码一个含339个氨基酸的蛋 白质，其N一端为碱性区亮氨酸拉链(bzIP)结构，c一端为富含脯氨酸重复的区域，具有与肿瘤蛋白 vator)n““。但其与MDv致瘤作用的关系及其机制，目前尚未得到证实和弄清。 研究和阐明Meq基因产物生物学功能的主要障碍之一是难以获得足够数量内源性的基因蛋 白。为了解决这一难题，我们选择杆状病毒／昆虫细胞这一真核细胞表达系统来产生Meq蛋白。杆 caIifornica 状病毒表达载体是源于苜蓿银纹夜蛾核多角体病病毒(Autograha virus，AcNPv)的核酸并经基因改造发展而成的，已切除了核多角体蛋白基因，外源基因则可克隆 到这一位置，在保留的强有力的多角体启动子(PPH)的作用下，重组病毒在感染宿主细胞—～草地 frigiperda)的卵巢细胞系sF9后，外源基因可得到大量表达。除此之外，由于这 贪夜蛾(spodoptera 是在较高级的真核细胞内进行的，蛋白质翻译后还发生了许多的修饰、加工等过程，这对于重组蛋 白完整的生物学功能而言是必需的，因而使其在抗原性、免疫原性及功能性上与原蛋白相似“4。 本研究成功构建了重组杆状病毒，并对其在昆虫细胞系上表达Meq蛋白的情况进行了研究。