产品初始污染菌检测方法适用性验证方案wm.docx

………………产品初始污染菌检测方法适用性验证 产品初始污染菌检测方法适用性验证 项目名称 产品初始污染菌检测方法适用性验证 项目编号 编制人员 日 期 审核人员 日 期 批准人员 日 期  目录 概述 验证目的 适用范围 验证依据 验证小组成员及职责 试验材料 样品洗脱方法回收率验证 技术方法验证 验证方案的评定和建议 验证方案的最终审核意见 产品初始污染菌检测方法适用性验证报告 产品初始污染菌检测方法适用性验证 概述 初始污染菌是用于检测产品未灭菌前屏障系统表面或内在的活微生物数量。初始污染菌回收率用于补偿无法从产品中完全取出的微生物的数值。是用特定的技术从产品上移除并培养微生物的方法，测定灭菌前产品细菌总数可用来判断产品受细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对产品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，可为下一步灭菌提供参考依据。确保本企业所生产的成品符合产品标准要求。 验证目的 确定产品初始污染菌检测方法 适用范围 本公司产品的初始污染菌检测 验证依据 《中国药典》2015版?通则1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法； ISO11737-1:2006?医疗器械的灭菌?微生物学方法?第一部分：产品上微生物总数的测定； GB/T19973-12005?医疗器械的灭菌微生物学方法?第一部分：产品上微生物总数的估计； GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准； 验证小组成员及职责 小组人员职务 姓名 所在部门 职责 组长 组员 组员 试验材料 试验产品： 仪器与设备： DSX-280B手提式压力蒸汽灭菌器，SPX-150型生化培养箱，SW-CJ系列洁净工作台，MJK-150型霉菌培养箱，BSC-1000ⅡA2生物安全柜，ZW型集菌仪 ，GZX-9076MBE电热鼓风干燥箱。 其他试验材料：微孔滤膜（孔径≤0.45um，直径约50mm）、量筒、镊子、吸管、酒精灯、试管、75%乙醇棉签、灭菌刻度吸量管（1ml）、灭菌硼硅酸玻璃培养皿（φ90mm×15mm）、锥形瓶，灭菌手术剪、无菌烧杯等。 培养基及稀释液： 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙式葡萄糖琼脂培养基 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 0.9%NaCl溶液 菌种： 金黄色葡萄球菌 白色念珠菌 样品洗脱方法回收率验证 方法描述 验证试验应进行3次独立的平行试验，每次试验时，先将已知菌落数的悬液菌液涂布于样品上，然后对同一样品进行多次洗脱处理，每次洗脱后的供试液通过薄膜过滤法过滤，培养并计数，得出回收率。 样品准备 取产品（未组装的），灭菌 菌液制备 试验步骤 样品处理：取50~100cfu的 菌液，均匀涂布于样品（最难洗脱的部位）上，自然晾干。 样品洗脱：在净化台下取处理后的样品，浸没于装有一定体积的0.9%无菌NaCL溶液的适合容器中，手工震摇5分钟洗脱样品中的菌，作为供试液，做好标记。 按7.4.2再反复洗脱3次，分别做好标记。 采用薄膜过滤法，将每一次洗脱的供试液分别过滤集菌于不同的膜上，取下滤膜正面朝上贴于相应的培养基平皿上，置该培养基的温培养条件进行培养； 计数：对每一次洗脱的菌落进行计数，并记录于下表1中 回收率计算 第一次洗脱的菌落数 回收率= 总菌落数 结果判定 在3次独立平行试验中，回收率均应大于70%，则洗脱方法有效，若任一次试验中回收率低于70%，则应排除干扰因素，并重新验证，或选择回收率最接近要求的方法和试验条件进行试验。 计数方法验证 方法描述 验证试验应进行3次独立的平行试验，每次试验分四个组，试验组、菌液组、供试品对照组、洗脱液对照组。并分别计算各试验菌的每次试验回收率。 供试液的制备：按7.的方法制备。 试验步骤： 试验组 将供试液用薄膜过滤法过滤，并加入100ml（1ml含50-100cfu的试验菌和99mlPH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）稀释的菌悬液，过滤后将滤膜取下，菌面朝上贴在对应培养皿上，培养并计数。 菌液组 加入100ml（含50-100cfu的试验菌和99mlPH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）稀释的菌悬液，用薄膜过滤法过滤后，培养并计数。 供试品对照组 将供试液用薄膜过滤法过滤，加100mlPH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，用薄膜过滤法过滤后，培养并计数。 洗脱液对照组 将样品洗脱液用薄膜过滤法过滤，加入100ml（含50-100cfu的试验菌和99mlPH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液）稀释的菌悬液，用薄膜过滤法过滤后，培养并计数。 结果判定