减味寿胎丸对复发性自然流产（RSA）小鼠蜕膜中Annexin A2和DCs的影响研究.docVIP

精品论文 参考文献 减味寿胎丸对复发性自然流产（RSA）小鼠蜕膜中Annexin A2和DCs的影响研究 江西中医药大学附属医院 南昌 330006 【摘 要】目的：探讨减味寿胎丸对复发性自然流产（RSA）小鼠蜕膜中Annexin A2和DCs的影响。方法：建立CBA/J xDBA/2孕鼠反复自然流产和CBA/JxBALB/c孕鼠正常妊娠模型，按妊娠顺序随机分为RSA模型组、减味寿胎丸高、中、低组，分别灌胃2周后比较蜕膜组织Annexin A2及CD83+、CD1a表达水平。结果：正常组、减味寿胎丸高、中、低组蜕膜组织Annexin A2及CD83+、CD1a表达水平较模型组明显变化，减味寿胎丸高组Annexin A2表达水平明显高于减味寿胎丸中、低组，CD83+、CD1a水平降低，差异有统计学意义（Plt;0.05）。结论：减味寿胎丸可改善复发性自然流产（RSA）小鼠蜕膜组织高凝状态，调节免疫。 【关键词】减味寿胎丸；复发性自然流产；膜联蛋白A2；树突状细胞 复发性自然流产（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指连续2次以上的不足20周胎龄的自然流产[1]。既往研究表明，RSA发生率约1%，其在给孕妇造成心理创伤的同时甚至导致不孕，感染、内分泌失调、染色体异常等因素均可引发RSA[2]。膜联蛋白A2（Annexin A2）是一组钙离子依赖的磷脂结合蛋白，对维持血管内血液通畅，预防血栓具有重要作用。树突状细胞（DCs）是体内功能最强的抗原提呈细胞，为维持母胎界面免疫功能中具有重要作用。本研究分析减味寿胎丸对RSA小鼠蜕膜中Annexin A2和DCs的影响，以初步探讨减味寿胎丸的作用机制。 1 材料 1.1 实验动物 健康雌性CBA/J小鼠，SPF级，10周龄，50只；健康雄性DBA/2小鼠，SPF级，10周龄，20只；健康雄性BALB/C小鼠，SPF级，10周龄，5只。均由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：No.44005900000741。 1.2 实验药物 减味寿胎丸复方由菟丝子400g、桑寄生300g、续断300g组成，分别将其制备成复方醇提物和复方水提物，将两者合并既得减味寿胎丸复方总提物样品。 1.3实验仪器 BMJ-1生物组织包埋机（天津航空机电公司），Shandon325型石蜡切片机（英国Shandon公司），KPY-1烤片机（天津航空机电公司），Motic B5显微摄像系统（麦克奥迪实业集团公司），Image pro plus 6.0医学图像分析系统；DAB显色剂：武汉博士德生物工程有限公司；小鼠可溶性CD1a、CD83试剂盒、SABC试剂盒和膜联蛋白A2免疫组化试剂盒均购于美国Proteintech公司。 2 方法 2.1造模方法 将50只雌性CBA/J小鼠分别与20只雄性DBA/2小鼠和5只BALB/c小鼠合笼交配，检出阴栓者计为妊娠第1天，分别建立反复自然流产模型40只与正常妊娠模型10只。 2.2分组及给药方法 按妊娠顺序随机分为RSA模型组、减味寿胎丸高、中、低组，自妊娠第1d灌胃，体积2ml/100g，减味寿胎丸高、中、低组剂量为12g、6、3g生药/kg，模型组及正常组予以相同体积蒸馏水，连续灌胃2周。 2.3 标本制备 孕2周断颈处死小鼠，离体妊娠子宫后自子宫角处钝性撕开子宫壁，于着床部位剥离胎儿胎盘单位，剪刀分离着床部位蜕膜组织，取5个着床部位，以预冷的PBS充分冲洗后放置于液氮中保存。 2.4免疫组化检测 石蜡切片厚度5micro;m，常规脱蜡至水，3% H20210 min，抗原修复10min，一抗4℃过夜，二抗370C30min，DAB显色，苏木素复染，常规脱水、二甲苯透明、树脂封片观察。每组选取6张切片观察所有阳性颗粒，计算面密度（阳性目标总面积/统计场总面积），定量表达免疫组化阳性反应程度。以 beta;-actin作为内参，通过计算机图象分析系统计算各值与 beta;-actin光密度比值，作为Annexin A2的相对表达量。 2.5统计学方法 采用SPSS19.0软件分析处理数据，计量资料以均数 标准差（ ）表示，多个样本均数比较采用单因素方差分析，组间方差分析用F检验，P＜0.05为有统计学意义。 3 结果 3.1各组小鼠蜕膜组织Annexin A2表达水平比较 正常组及减味寿胎丸