去甲斑蟊素抑制裸鼠原位胰腺癌的作用机制研究.docVIP

精品论文 参考文献 去甲斑蟊素抑制裸鼠原位胰腺癌的作用机制研究 宋 冰 张文婧△ 郭仁德 谷 川 　　天津市第一中心医院普外科 天津 300192 　　【摘 要】目的：观察去甲斑蝥素（NCTD）对裸鼠原位胰腺癌血管生成及瘤体血管内皮细胞生长因子（VEGF）、血管内皮细胞钙黏蛋白（VE‐Cd）、低氧诱导因子-lalpha;(HIF-lalpha;)表达的影响 ，探讨NCTD抑制胰腺癌的可能作用机制。方法：胰腺癌细胞（Capan-2）培养转代后注射到裸鼠胰尾部被膜下建立移植瘤模型，40只胰腺癌（Capan-2细胞）移植瘤裸鼠，随机分成对照（NS）组20只和实验（NCTD）组20只。采用免疫组化法分析VE‐Cd、,VEGF、HIF-lalpha;等促血管生成因子的表达水平。结果：与对照组相比 ，经NCTD干预的裸鼠生长状态基本不受影响，但瘤体生长受到抑制，瘤内血流峰值（PI）明显下降，VE‐Cd、,VEGF、HIF-lalpha;表达减少，差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：去甲斑蝥素能明显抑制胰腺癌的血管生成，其机制跟下调VEGF 、VE‐Cd 、HIF-lalpha;等促血管生成因子的表达有关。 　　【关键词】去甲斑蝥素；胰腺癌；血管内皮生长因子；血管内皮细胞钙黏蛋白 　　【中图分类号】R322.4+91 【文献标识码】B 【文章编号】1764-8999（2015）7-0609-02 　　胰腺癌是一种恶性程度极高的消化道肿瘤，具有起病隐匿，病情进展迅速、预后差等特点，诊断治疗均较困难。近年来胰腺癌发病率、死亡率均呈上升趋势。有资料显示，全世界胰腺癌发病率约为每年185000例，而我国的胰腺癌的发病率已达5.1/10万1。去甲斑蝥素（norcantharidin，NCTD）是我国传统中药斑蝥有效成分斑蝥素的衍生物。大量研究结果表明，NCTD对肝癌、胆囊癌等肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用2。然而，NCTD对人胰腺癌的抑制作用报道较少，本研究旨在观察NCTD对裸鼠胰腺移植瘤血管生成及VE‐Cd、,VEGF、HIF-lalpha;的表达的影响，探讨其抗胰腺癌的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　NCTD购自南京泽朗医药科技公司（纯度 ＞99％ ） ；胰腺癌细胞株（Capan-2）购自中国科学院上海细胞库；BALB/cnu/nu裸小鼠４０只，购自上海肿瘤研究所实验动物部，雄性，鼠龄6～8周，体质量20g左右，在SPF级条件下饲养。RPMI‐1640培养液和胎牛血清（FBS）购自美国Gibco公司 ；兔抗VE‐Cd单克隆抗体购自Abcam公司 ，兔抗VEGF 、HIF-lalpha;、CD34多克隆抗体以及辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔多克隆抗体购自Ramp;D公司。Ｂ超仪使用具有超声造影程序的Simens$2000超声诊断仪。 　　1.2方法 　　1.2.1细胞的培养和传代 　　胰腺癌Capan-2细胞采用贴壁培养的方法，养于37℃含5％C02的培养箱中。使用添加有10％胎牛血清并100 U／ml青霉素和100 U／ml链霉素的RPMIl640培养基进行细胞培养，长至80％、90％细胞时传代。取对数生长期的细胞用于实验研究。 　　1.2.2动物模型建立、分组及给药方法 　　2％戊巴比妥钠(50mg／Kg)腹腔注射麻醉裸鼠，取左上腹直肌旁lcm切口，暴露脾脏和胰腺尾部，用50u L微量注射器吸取50u L胰腺癌细胞悬液，在放大镜下注射到脾脏下面的胰尾部被膜下，以被膜下出现可鉴别的隆起性液泡而无液体渗漏到腹腔为注射成功的标志。注射成功后分两层关闭腹壁，共制备40只裸鼠。4周后如可在裸鼠左上腹触及一结节，即为模型建立成功。40只裸鼠均造模成功。鼠称重后随机分为2组：对照（生理盐水）组(NS)、去甲斑蝥素组(NCTD),每组20只。分组当天开始腹腔注射给药，对照组 0.9%生理盐水腹腔注射0.4mL；实验组 NCTD?20mg/kg 腹腔注射,均每3天一次，共7次。 　　1.2.3 超声造影法检测两组原位移植瘤的血供情况 　　末次给药后第7天麻醉裸鼠，俯卧位置于操作台上，探头和裸鼠皮肤间涂以离心后的超声耦合剂。经尾静脉团注超声造影剂20mL，随即推注0.2mL生理盐水，同时开始采集l min的造影全过程。图像采集帧频30～37Hz，使用内置的超声造影分析软件在机分析，造影录像以DICOM的AVI格式导出，应用对比脉冲序列造影成像技术对肿瘤的血供进行定量评价。以整个移植瘤为感兴趣区(region of interesting，ROI)，获得峰值强度(peak intensity，PI)参数。 　　1.2.４原位移植瘤数据采集 　　末次给药后第7天处死所有裸鼠，解剖胰腺原位