台盼兰染色法在30株皮肤真菌药敏试验中的应用效果分析.docVIP

精品论文 参考文献 台盼兰染色法在30株皮肤真菌药敏试验中的应用效果分析 石德柱 　　（江苏省赣榆县金山镇卫生院检验科 222115） 　　【摘要】目的：验证台盼兰染色法在真菌药物敏感试验中的应用效果。方法：分别测定特比萘芬和伊曲康唑对30株临床常见皮肤癣菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度值。其中最低杀菌浓度值的测定用台盼兰染色法与常规培养法进行比较。结果: 特比萘芬对皮肤藓菌的最低抑菌浓度值与最低杀菌浓度值相同，为0.001—0.004ug/ml。结论： 特比萘芬有抑菌和杀菌的双重作用。台盼兰染色法具有方便、快捷的特点，对于判断真菌的活性及评价抗真菌药物的MBC较常规方法更为优越，值得进一步推广应用。 　　【关键词】台盼兰染色 真菌药敏感试验 MIC(最低抑菌浓度) MBC(最低杀菌浓度) 　　【中图分类号】R75 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）20-0180-02 　　抗真菌药物的体外药敏试验是测定药物对致病真菌的敏感程度、及杀灭效力。实验结果对指导临床用药有重要价值。体外药敏实验用来常规测定最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。但常规方法实验时间较长。由于台盼兰染色法只能使丧失活性的真菌着色，因此用台盼兰染色法与常规最低杀菌浓度值测定进行对照:一方面用来验证台盼兰染色在药敏中的应用及测定药物的最低杀菌浓度值可行性，另一方面用来比较此法测定抗真菌药物的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度值的浓度有无差别来测试抗真菌药物的效力。 　　１ 材料与方法 　　1.1.1 药品来源：(1)特比萘芬（纯品），山东齐鲁药厂提供。（2）伊曲康唑（纯品）西安扬森药厂提供。 　　1.1.2 菌株来源：江苏省赣榆县人民医院检验科真菌实验分离致病菌株共30株皮肤癣菌。其中红色毛癣菌20株,石膏小孢子菌10株。 　　1.1.3 培养基：(1)固体沙氏培养基（2）改良沙氏液体培养基：称葡萄糖20g蛋白胨10g加入蒸馏水1000ml中高压蒸气灭菌，4℃储存备用。 　　1.2.1 制备药物保存液和工作液：称特比萘芬、伊曲康唑各12.8mg，分别溶于1ml纯二甲亚砜中即成12.8mg/ml，储存4℃冰箱备用,保存有效期为一周。实验时用场50%二甲亚砜稀释1000倍，进一步用基础液体培养基稀释25倍，即得实验工作液浓度分别为特比萘芬0.512ug/ml，伊曲康唑0.512ug/ml。 　　1.2.2 菌悬液制备：实验前用固体沙氏培养基传代培养；25℃孵育一周，选生长良好的菌落用沙氏液体培养基冲洗，制成菌悬液，用无菌纱布过滤收集孢 子并用沙氏液体培养基调整至0.5号麦氏管浓度（即1.0times;108CFU/ml）再1:1000稀释至1.0times;105CFU/ml。 　　1.2.3 台盼兰染色液配制：用PH6.8PBS缓冲液充分溶解浓度为0.01%。 　　1.2.4 液体培养基稀释法［1］：用改良沙氏液体培养基为基础培养基，采用液体培养基进行2倍系列稀释使其终浓度(ug/ml)为0.512、0.256……0.004、0.002、0.001.体外测定特比萘芬和伊曲康唑的抗菌力，设无药对照管和溶媒对照管，接种浓度为1.0times;105CFU/ml, 30℃孵育24h观察结果。 　　1.2.5 MIC值判定法：肉眼下液体培养基清亮与药物空白对照相同为抑菌即阴性，液体培养基浑浊或有菌膜生长，则为无抑菌作用即阳性。 　　1.2.6 常规法测MBC值：取50ul有抑菌作用的菌悬液接种于固体沙氏培养基上，30℃孵育24h观察，有菌生长为阳性，无菌生长为阴性即杀菌。 　　1.2.7　台盼兰染色法：取10ul上述各管菌悬液于载玻片上，与0.01%台盼兰10ul充分混匀后，显微镜检查，菌丝和孢子内出现蓝色颗粒染料为死亡的真菌，无蓝色颗粒者为活性真菌,菌丝和孢子中有蓝色颗粒者占99.9%的那管药物浓度即该菌的MBC。 　　２ 结果 　　30株皮肤癣菌体外MIC值测定：特比萘芬的MIC值范围为0.001—0.004ug/ml,其中红色毛癣菌最低为0.001—0.002ug/ml。伊曲康唑的MIC值范围为0.001—0.008ug/ml,其中红色毛癣菌MIC为0.001—0.002ug/ml,与特比萘芬相同（见附表）。 　　30株皮肤癣菌体外MBC值测定：特比萘芬的MBC值0.001—0.004ug/ml，其中红色毛癣菌为0.001—0.002ug/ml，与MIC值相同，具有杀菌作用。伊曲康唑的MBC值为0.016ug/ml—0.256ug/ml，其中红色毛癣菌为0.016—0.064ug/ml。台盼兰染色法与常规培养法测得MBC值一