固态发酵复合酶最佳工艺条件的研究.pdfVIP

酶制剂蔫淼烈襞煞需丽丽丽『—————————————一 画悫发酵复合酶最僮重巷条件的研究 刘德海，安明理，王红云，周伏忠，张秀江 (河南省科学院生物研究所，郑州450008) 摘要：根据猪的消化生理特点和选择的饲料原料，确定猪用复合酶以酸性蛋白酶、木聚糖 酶为主，兼有纤维素酶，并采用单因素搜索试验对培养基组成、培养条件进行优化。试验确 定的最佳培养基组成为：麸皮60 2 o．05 g，纤维素粉40g，豆粕10g，(N地)2s04g．MgS04g， K2HP040．1 xlOs个孢子，培 g。最佳培养条件为：接种量w(曲种)为0．3％，每克原料含3 养温度30—35℃和适宜的培养时间。在此条件下，所产酶活力分别为：纤维素酶 8597 054 U／g，木聚糖酶5 U／g，酸性蛋白酶861U／g。 关键词：固态发酵；复合酶；培养条件；酶活力 目前，酶制剂有几千种，可应用于饲料工业的有如多种(邱楚武，2001)。酶制剂由于能有效提 高饲料利用率，节约饲料原料资源，消除抗营养因子，激活内源酶的分泌，且无毒副作用，不存在药 物添加剂的药物残留和产生耐药性等不良影响，因而是一种环保和绿色的饲料添加剂，近几年来在饲 料工业中得到了广泛应用。复合酶制剂的生产，国外多采用单菌株液态发酵生产单酶制剂，再通过复 配形成复合酶产品，此方法条件要求高，成本高；而我国饲料工业附加值低，饲料用酶无需精制，因 此，除植酸酶的生产主要用液态发酵外，国内复合酶制剂的生产一般采用固态发酵(赵德英等， 1999)。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1菌种 豫生1号纤维素酶菌种，豫生2号木聚糖酶菌种，豫生3号蛋白酶菌种，均由河南省科学院生物 研究所筛选。 PDA培养基；一级扩大种子培养基：麸皮、葡萄糖、无机盐调pH=6．00；二级扩大 、纤维素粉、无机盐调pH=6．00；发酵培养基：纤维素粉、麸皮、豆粕、无机盐调 1．2发酵培养方法 斜面菌种培养：29±1℃，培养3～4d。扩大种子培养基：29±1℃，培养3～4d。固体发酵培养： 每100 ml水，拌匀，装入盒中用手提式高压蒸汽灭菌锅(蒸汽压力为1．2kPa)，于 g原料加人100 121。C高压蒸汽灭菌30 中，于恒温箱(29±1c|C)，保温保湿培养15—16h，曲料接块，若品温过高(35。C)，可进行翻随1 次，以供给菌丝生长所需氧气，发酵26～28h后，曲料变色发黄，即成熟。 1．3分析测定 糖溶液，其他操作同纤维素酶活力测定。 2结果及讨论 2．1固体发酵培养基的筛选 2．1．1碳源对酶活的影响 以纤维素粉、麸皮作为供试碳源，测定各项酶活力，找出最佳产酶培养基，测定结果如表1所示。 由表1可以看出，以麸皮(1号)、麸皮与纤维素粉(3号，4号)为碳源培养基的各项酶活力较高，对 结果综合比较发现，3号较佳，它与1号、4号相比，纤维素酶活力相当，但木聚糖酶活力和糖化酶活 力较高。比较3号和4号碳源组合，随着麸皮相对纤维素粉比例增加，各种酶活力都有一定程度增加， 而且以麸皮作为碳源相对以纤维素粉为碳源，纤维素酶、木聚糖酶、酸性蛋白酶和糖化酶活力分别高 工业微生物所(1976)的研究报道存在一定的不一致，但与费笛波(1996)的报道一致。 表1最佳碳源试验结果 1 麸皮100 060 5120 850 2110 g(料水比1：1)8 2 纤维索粉1130 6230 4812 532 1930 g(料水比l：1．4) 3 麸皮印g+纤维素粉40g(料水比1：1．3) 7965 5261 822 2163 4 麸皮50