不同程度溶血对ELISA双抗夹心法检测HBsAg实验结果影响的探讨.docVIP

精品论文 参考文献 不同程度溶血对ELISA双抗夹心法检测HBsAg实验结果影响的探讨 谢开燕 （成都市新都区妇幼保健院检验科 610500） 【摘要】目的 探讨标本溶血对酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗夹心法检测乙肝表面抗原（HBsAg）的影响。方法　使用ELISA双抗夹心法对10例阴性标本及系列阴性溶血标本进行HBsAg的检测。结果　阴性溶血标本的S/CO值普遍高于正常血浆标本，随着溶血程度的增加，S/CO值也随之增大，甚至出现假阳性的结果，溶血对正常阴性标本的检测结果有一定影响。结论　当标本溶血达到一定程度时，才能导致ELISA检测HBsAg的假阳性。故临床检测中为了保证检测质量，应尽量避免溶血标本。 【关键词】溶血 ELISA HBsAg 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）22-0170-02 乙肝表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎的血清学标志。目前应用HBsAg的酶免疫测定（ELISA）,因其方法简便，灵敏度高，特异性强，实验条件要求不高，被各级医疗机构广泛采用。但是ELISA法影响因素众多，如（溶血，脂血，洗板检测等）。各种原因的溶血，造成非特异性物质对实验影响，致使检验结果出现假阳性，故本试验进一步阐述不同程度的溶血对ELISA影响如何，现探讨如下： 1 材料和方法 1.1 血浆标本：HBsAg,抗HCV,抗HIV,TP均为阴性的标本10份。 1.2 溶血标本的制备：分离上述10份标本的部分血浆于另一试管中，作好标记。将剩余标本置—20度冰箱中冻溶，于37度水浴箱中融化，离心。用全自动生化分析仪分别测定上清夜中游离血红蛋白（FHb）的含量.根据血红蛋白浓度的不同，并用其血清配制成Hb浓度为160g/l、80g/l、40g/l、20g/l、10g/l的一系列溶血标本备用。 1.3 试剂 英科新创(厦门)科技有限公司生产的HBsAg诊断试剂盒(批号2009106133)。 1.4 主要仪器 汇松PW-960全自动洗板机，酶标仪MK3，定时器，迈瑞5300血细胞分析仪，XK96型振荡器 。 1.5 方法 分别检测10份阴性标本及系列阴性溶血标本，所有操作均严格遵守试剂说明书。 2 结果 10份阴性标本及系列阴性溶血标本的检测结果见表。 原血清 10 g/l 20g/l 40g/l 80g/l 160g/l 标本1 0.023 0.103 0.224 0.556 0.669 0.795 标本2 0.026 0.125 0.278 0.549 0.795 0.885 标本3 0.045 0.286 0.498 0.701 0.705 0.967 标本4 0.052 0.356 0.501 0.795 0.887 1.790 标本5 0.023 0.175 0.264 0.501 0.724 0.887 标本6 0.034 0.275 0.346 0.621 0.805 0.975 标本7 0.043 0.314 0.409 0.667 0.802 0.984 标本8 0.028 0.174 0.224 0.516 0.657 0.879 标本9 0.065 0.368 0.518 0.801 1.127 2.570 标本10 0.056 0.286 0.497 0.785 1.006 2.010 3 讨论 以上分析可知血液标本轻度溶血时，HBsAg呈阴性，只有当血液标本溶血达到一定水平时，才导致HBsAg结果假阳性。ELISA中最常用的酶是辣根过氧化酶（HRP）,它是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成的含铁卟啉蛋白质。HRP催化下列反应：DH2+H2O2—D+H2O 式中DH2为供氢体，H2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很强。在ELISA中常用的供氢体底物是四甲基联苯胺（TMB）,TMB经酶作用后由无色变为蓝色，稳定性很好。血红蛋白中的亚铁血红素具有弱过氧化物酶样活性，可催化过氧化氢和色原的反应，使后者氧化呈色。随标本溶血程度的增加，红细胞释放出来的血红蛋白也不断增加，其中的亚铁血红素具有的过氧化物酶样活性也不断增加，使其氧化呈色反应不断增强，