植物组织培养 第六章 植物离体快繁.ppt

第六章 植物离体快繁殖 一、植物离体快繁的意义 二、离体快繁的方法 三、离体快繁中存在问题 四、几种植物的离体快繁技术 一、植物离体快繁的意义 一、植物离体快繁的意义 2.快繁意义 1）繁殖系数高，速度快； 2）解决其他繁殖方法不能繁殖的植物繁殖； 3）结合快繁技术，对植物脱毒，得到无毒种苗。 4）可以周年生产（工厂化生产）。 二、离体快繁的方法 分以下5个阶段： A.无菌培养的建立： B.初代培养： C.继代培养和快速增殖： D.诱导生根： E.驯化移栽： 二、离体快繁的方法 1.无菌培养的建立：整个实验过程要求在无菌的条件下完成。 常存在问题： A.培养基灭菌不规范： B.无菌环境不达标： C.操作不规范：主要接种环节的无菌操作； D.外植体消毒失败：过长或过断 E.外植体选择（老嫩）、切（刀不锋利）、接（极性不对）不科学： 二、离体快繁的方法 2.茎芽增殖途径：在培养过程中使其产生大量无根试管苗。 侧芽增殖途径 途径有：不定芽增殖途径 体细胞胚增殖途径 （增加 P105图8-1） 二、离体快繁的方法 2.茎芽增殖途径：在培养过程中使其产生大量无根试管苗。 侧芽增殖途径 途径有：不定芽增殖途径 体细胞胚增殖途径 （增加 P105图8-1） 体细胞胚 体细胞胚，是由体细胞发育成的胚。胚由受精卵发育而来，这在生物学中是大家所熟知的，但实际上胚不一定从受精卵发育来，尤其在植物界，往往可以看到未受精的卵细胞或胚囊细胞、珠心细胞等发育成胚的现象。严格地说，除卵以外的胚囊细胞和珠心细胞等都应属于体细胞的范畴，由体细胞发育成的胚就叫做体细胞胚。 二、离体快繁的方法 3.影响芽增殖的因素 A.植物种类：营养繁殖易成活的成功率高。 B.外植体生理状态：生长旺盛时期取材易成功 C.外植体消毒受害程度：时间、种类和浓度 D.培养基配方、激素配比： 三、离体快繁中存在问题 培养过程中常出现的问题有以下4各方面 1.培养物污染： 污染现象：外植体表面、周围或培养基中。 表现：霉变、浑浊、黏液状和发酵泡沫状。 三、离体快繁中存在问题 三、离体快繁中存在问题 2.褐化：外植体接种到培养基中后，外植体或与培养基接触部位出现变褐色的现象。 褐化后果：不加以控制，外植体会死亡。 引起原因：切割后，使液泡中的多酚物质与细胞质中多酚氧化酶接触发生反应，产生有毒的醌类物质。 在自然界中，褐化（多酚物质与多酚氧化酶反应）是主动防御机制，防止病原菌感染的自卫措施。 三、离体快繁中存在问题 褐化防止措施 1）取材母株处理：对取材植株避光或黑暗处理。 2）切割合理：刀要锋利，动作要快，伤口尽量小。 3）低温处理：接种后先在5℃条件下处理一段时间。 4）培养基：选用1/2MS培养基，对有些植物有作用。 5）改善培养条件：弱光或黑暗中培养会减少褐化。 6）加防褐化剂：0.5-5g/L VC、0.5-3%活性炭等 7）换培养基：连续继代培养出现褐化时，换新的培养基，多数植物出现褐化换2-3次培养基，褐化明显减轻。 三、离体快繁中存在问题 3.玻璃化： 概念：在植物组织培养过程中，出现一种试管苗变成膨胀、半透明、易折断的畸形现象。 特点：分化能力低，难以增殖生根成苗。 三、离体快繁中存在问题 玻璃化形成原因：因植物种类不同存在差异，概括起来有以下几种情况； 1）激素浓度不合理：激素浓度过高，尤其是细胞分裂素浓度提高(或细胞分裂素与生长素比例高)，易导致玻璃化苗的产生。 产生玻璃化苗的细胞分裂素浓度因植物种类的不同而异。。 三、离体快繁中存在问题 2）温度低：适宜的温度可以使试管苗生长良好，当温度低时，容易形成玻璃化苗，温度越低玻璃化苗的比例越高。温度高时玻璃化苗减少，且发生的时间较晚。 3）光照不足：光照分强度和时间长短 时间：满足植物的光照时间，试管苗才能生长正常。大多数植物在10～12h光照下都能生长良好，光照时数大于15h时，玻璃化苗的比例明显增加 强度：光照弱，易产生玻璃化现象。 三、离体快繁中存在问题 4）琼脂浓度低： 培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，水浸状严重，苗向上长。随着琼脂浓度的增加，玻璃化苗比例减少。 但过硬的培养基影响了养分的吸收，试管苗生长减慢，分蘖亦减少。因此，琼脂的浓度一定要适当。 三、离体快繁中存在问题 5）环境条件（生长空间小和气体交换差） 在一定容量的培养瓶内，愈伤组织和试管苗生长越快，越容易形成玻璃化苗。 培养瓶容量小，气体交换不良，易发生玻璃化。 愈伤组织和试管苗长时间培养，不能及时转移，容易出现玻璃化苗。 培养瓶盖过严透气性差易形成玻璃化。 其中棉塞、滤纸、封口纸、牛皮纸通气性较好，破璃化苗的比例较低； 锡纸、用塑料膜封口时，不透