萝卜蛋白组分析中叶片蛋白质高效提取方法EffectiveMethodofLea.PDF

分子植物育种，2012年，第10卷，第6期，第756-760页 MolecularPlantBreeding,2012,Vol.10,No.6,756-760 技术主题 TechnologyFeature 萝卜蛋白组分析中叶片蛋白质高效提取方法 相菲 徐良 王燕 龚义勤 赖德强 柳李旺* 南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室,农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室,南京农业大学园艺学院,南京, 210095 *通讯作者,nauliulw@njau.edu.cn 摘 要 以萝卜‘NAU-JLQX09’叶片为材料，分别采用Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法和改进的PEG分级沉淀 法提取蛋白质，通过双向凝胶电泳技术比较两种方法的效果。结果表明，应用Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法提 取的蛋白2-DE图谱可识别出640个蛋白点；而改进的PEG分级沉降法的蛋白组分(F,F以及F)2-DE图 1 2 3 谱可清晰识别蛋白点数目分别为537，170与852，总蛋白点数目多且高丰度蛋白RuBisCO主要被沉降在F 2 中，F中分离到更多的低丰度蛋白点。因此，在进行萝卜叶片蛋白质组分析时，采用PEG分级沉降法提取叶 3 片蛋白，可获得较高质量的2-DE凝胶图谱。研究结果为应用蛋白质组学解析萝卜重要性状形成分子基础提 供了良好的技术支持。 关键词 萝卜,蛋白质提取,蛋白质组学,双向电泳 Radish * *Correspondingauthor,nauliulw@njau.edu.cn DOI:10.3969/mpb.010.000756 Abstract Inthisstudy,twoproteinextractionmethod compare-dwith2DEusingtheleavesofradishline‘NAU-JLQX09’ Acetonemethod,thenumberofprotei- modifiedPEGFractionationmethod,thenumberofprotei,FandF)by 1 2 3 2- -1,5-bis- phosphatecarbox 2,indicatin varietyoflow-abundantproteinscouldbedetecte-DEprofiledinF 3 withthePEGFractionatio resultsprovidedaneffectiveproteomictechnica agronomictraitsusingproteomictechniqueinradish. Radish( L.),Leafproteinextraction-DE ,Proteomic Keywords Raphanus sativus 随着进入后基因组学(Postgenomic时代，蛋白 s)和表征，以及数据库的搜索分析等主要环节。 目前蛋 质组学已经逐渐成为生命科学研究工作的核心内容 白质组学研究的焦点集中在发展高分辨率蛋白质的 之一(Rhoetal.,2008)。蛋白质组学分析主要包括高 分离和快速自动的蛋白质鉴定新技术上，但蛋白质提 质量蛋白质的提取、分离以及成像，蛋白的质谱鉴定 取和样品分离仍是其中最重要的步骤之一(Espagne 基金项目：本研究由国家自然科学基金、国家科技支撑计划课题(2012BAD02B01)、江苏省科技支撑计划(BE2010328) 和江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(12)2006]共同资助 分子植物育种 757 MolecularPlantBreeding etal.,2007)。