烟草K326叶片愈伤组织诱导及继代的初步研究.docVIP

烟草K326叶片愈伤组织诱导及继代的初步研究 安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2006.34(2):263.266责任编辑曹淑华责任校对曹淑华 烟草K326叶片愈伤组织诱导及继代的初步研究 刘卫群,刘巧真,石永春,王永亮(河南农业大学农学院,河南郑州450oo2) 摘要以烟草K326叶片为外植体,采用MS基本培养基,研究了不同激素组合时愈伤组织的诱导效果,以度继代培养过程中不同浓 度的NAA和6一BA时愈伤组织生长的影响.研究结果表明:2.4一D2.0mL,6-BA0.5mg/L组合诱导效果最好,7d后叶块边缘长出愈 伤组织.诱导率为100%.不同浓度NAA和6-BA组合的愈伤组织生长速度,结构,质地和颜色有显着差异.以NAA0.1mg/[+6一BA 3.0mg门L,NAA2.0mg/L+6-BA0.5mg/L和NAA1.5mg/L+6-BA0.5mg/L3种培养基组合的愈伤组织生长较快.其中前一组合愈伤组织 为绿黄色,结构致密,质地硬;后两种组合愈伤组织为黄白色,结构疏松.质地脆. 关键词烟草叶片;愈伤组织;诱导;继代培养 中图分类号$572文献标识码A文章编号0517—6611(2006)02—0263一Ol StudyonCallusInductionandSubcultureofLeafCultureofTobaccoVariety黝6 LIUWei-qunetaI【AgronomyCollegeofHenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou,Henan450002) AbstractTheleafoftobaccovariety-K326wasusedastheexplantsontheMSbasalmediumandtheinfluenceoncallusinductionbydifferent hormones.aswellastheinfluenceonitssubculturewiththecombinationofNAAand6-BAwerestudied.Theresultsshowedthat2.4-D2.0mg/L +6_BAO.5mg/Lwasthemosteffectivecombinationforcallusinduction.Duringthesubculture.thedifferentconcentrationofNAA+6一BA combinationhaddifferenteffectoncallusgrowth,structure,texture,colorandluster,andthecombinationsofNAA0.1mg/L+6一BA3.0mL. NAA2.0mg/L+6-BA0.5mg/LandNAA1.5mg/L+6-BA0.5m辱/Lwerepreferable.CallusonthemediumwithNAA0.1me4L+6-BA3.0me,/ Lwerethegreencolorwithyellow,tightnessandhard.CallusonNAA2.0mg/L+6-BA0.5mg/LandNAA1.5mg/L+6-BA0.5mg/Lwerethe yellowcolorwithwhite,looseandsoft. KeywordsTobaccoleaf;Callus;Induction;Subculture 愈伤组织是没有分化的无组织细胞团,其自身的特 点——细胞全能性,生长速度快,体积小,细胞壁薄.少角质 层和蜡质层等,使其成为很好的研究材料.这方面研究报道 很多,如通过给愈伤组织施加不同的选择压,获得烟草抗性 材料_】,-41,利用烟草细胞培养生产有用的次生代谢产物[51,制 造人工种子161等.烟草K326是目前生产中应用广泛的品 种,以其叶片诱导愈伤组织有现实意义.笔者对用不同激素 组合诱导烟草K326叶片愈伤组织和继代的效应进行了研究. 1材料与方法 1.1无菌苗的获得将烟草K326种子在浓度75%乙醇溶 液中浸泡30s,无菌水冲洗3次;然后在浓度0.05%HgC1 溶液中消毒5min;无菌水冲洗5次;播种于MS培养基, (28~1)oc,16h/d光照条件下进行发芽培养. 1.2愈伤组织的诱导及继代取室生烟叶片消毒处理后. 切成0.5cmxO.5cm大小叶块儿,同时取30d苗龄的无菌苗 叶片切块.将室生烟叶块和无菌苗叶块都接种至以MS为 基本培养基,含不同激素组合的愈伤组织诱导培养基(表1o 待愈伤组织长到黄豆粒大小,切取愈伤组织块转接至不同 浓度NAA和6-BA组合的继代培养基(表2).愈伤组织诱 导和继代培养条件同无菌苗培养条件. 表1不同愈伤组织诱导培养基mL 2结果与