替米考星和泰乐菌素对NO和IL10合成的调节作用研究.pdfVIP

兽医部分 替米考星和泰乐菌素对NO和IL一10合成的调节作用’ 曹兴元“ 沈建忠“ 吴聪明 (中国农业太学动物医学院北京100094) 摘要：替米考星是最近开发的兽用大环内酯类抗生素，为泰乐茸素的衍生物。有关研究显示替米考星可能通过非抗 浓度的替米考星和泰乐茵素均能在转录和翻译水平显著抑制RAW知胞合成No，井促进Ⅱ一10的夸成．而5倒mL的替米 考星和泰乐茵素均无明显的调节作用。替米考星和泰乐菌素可能在转录和翻译水平通过调节NO的合成井促进抗炎因子 m一10的合成而发挥抗炎作用。 关键词：替米考星；泰乐茵素；一氧化氮；请导型一氧化氮夸酶；白介素一10；单核一巨噬细胞。 在炎症的急性相反应中，巨噬细胞起着重要作用，当被病原微生物或内毒素激活后，巨噬细胞合成大 量的NO，参与炎症反应。因此，对NO的抑制可以有效控制炎症的发展。 替米考星是半合成大环内酯类抗生素，为泰乐菌素的衍生物，临床上广泛用于治疗牛、羊的呼吸道疾 病以及乳房炎‘“。通常替米考星的临床疗效归于其较好的药代动力学特征和对相关病原的较低的MIC 值。然而有证据显示：替米考星可能通过非抗菌活性的免疫调节机制来发挥抗炎作用，例如促进中性粒 细胞的凋亡和抑制肺泡巨噬细胞分泌PG品”】。对人用的大环内酯类抗生素的研究也发现，红霉素通过抑 泰乐菌素都属于大环内酯类抗生素，目前为止，尚未见两种药物对NO调节作用的系统报道。因此，我们 利用体外LPS处理小鼠RAW264．7单核一巨噬细胞构建的炎症模型，在转录和翻译水平研究了替米考星 和泰乐菌素是否对NO具有调节作用。 1材料与方法 1．1细胞 小鼠RAW264．7单核一巨噬细胞系购自协和医科大学细胞中心。 1．2药品和试剂 替米考星碱标准品购自罗氏公司，泰乐菌素碱标准品由济兴医药集团惠赠。DMEM高糖培养基，胎牛血 1．3细胞培养 细胞在含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基中培养，传代后种于24孔培养板中。共分为三组，空白 组(无药物和LPS处理)、LPS处理阳性对照组(LPS耻s／mL处理18 处理组，LPS和替米考星同时处理18个小时。每组各为三个平行。 ofAntia／erobial Journal ·本文受国家杰出青年基金资助(No。已于2006年发表在IntemsfionalA铲曲27卷o ··曹兴元，男，1975年出生．汉族，河北人，讲师，博士。研究方向|分子药理学。E—fflail：删eao@126．cam。 m通讯作者：沈建忠，博士生导师，教授oE一衄n：日{z@eaa．幽．m。 2006学术年会 1．4替米考星和泰乐菌素的毒理学评价 x 应用MIT检测方法进行评价。取对数生长期IlAw细胞接种于48孔培养板中，1105个细胞，孔，37 ℃，5％co：条件下培养20h后，再加10皿MTr(Smg／mL)继续培养4h，然后加入DMSO100皿溶解，用酶 联免疫检测仪于595mn处测定各}L光吸收值(OD值)，计算出细胞相对活率。 1．5 NO和lL一10的检测 ． NO和几一lO的检测依照试剂盒说明书进行。 1．6诱导型一氧化氮合酶的活性检测 mmol／L 收集培养细胞，4。C，加入预冷的40 Tris—HCI缓冲液(pH8．0)(含有1蜡，mL丝氨酸蛋白酶 抑制剂，5ng／mL胃蛋白酶抑制剂，5 PMSF)，经过3个液氮一冰水浴循环裂解细 ee,／rIlL抑肽酶和100,aM 胞。将细胞裂解液1213000 5的步骤进行NO的测定。 1．7蛋白质印迹 移到硝酸纤维素滤膜上。加入兔抗小鼠iNOS多克隆抗体，稀释度为1：700，4℃，孵育20h，然后加入碱 度值(OD)作定量分析。 1．8半定量Frr—PGR