色谱实验讲义(二).docVIP

实验一 色谱实验－)2 四、仪器和试剂 气相色谱仪122， 注射器。 苯（AR），甲苯（AR），对二甲苯（AR）。 五、试验步骤 1、先按各仪器操作要求调节好仪器 GC-122 OVEN 55℃ DET：180℃ INT：180℃ 2、苯、甲苯、对二甲苯溶液溶于二硫化碳，用1μl注射器分别注入色谱仪中，作出色谱流出曲线， 3、根据色谱流出曲线的参数算出理论塔板数。 4、改变柱温为60℃，再次测出苯的色谱流出曲线，比较塔板数计算结果。 六、实验后问题 1、三种物质的塔数是否相同，为什么？ 2、塔板数受哪此因素影响，影响结果如何？ 3、浓度是否影响塔板数，为什么？ 实验二 色谱实验－实验三 气相色谱实验 白酒中甲醇的百分含量及其它成分的定性检测 一、目的 1、掌握归一化法计算组分百分含量的方法； 2、了解白酒成分定性检测方法； 二、原理 用FID检测器对白酒中各组分定性，在一定操作条件下物质均有各自确定的保留值，根据混合样色谱图和标准样色谱图的各相应组分保留值之比较，确定不同组分。 三、实验部分 1、市售白酒直接进样，观察产生多少个峰？ 2、利用提供的标准样确定白酒的相应色谱峰； 3、计算甲醇大致的百分含量？（甲醇等的相对校正因子按“1”计） 四、实验后问题 请同学自己查资料了解白酒分析需使用什么固定液，为什么？ 实验四 气相色谱实验－－C（还原型）纯品为白色无臭结晶，熔点190～192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定。维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸，如果进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。 维生素C含量的测定方法很多，本实验介绍三种测定方法：线性扫描极谱法、分光光度法和HPLC法。 一．实验目的 1、了解线性扫描极谱法的原理和应用 2、用标准曲线法测定水果中维生素C的含量。 二．实验原理 还原型维生素C中的烯二醇基具有还原性，在一定电位下，它在汞滴表面氧化，产生与含量成正比的峰电流，即 。 三．仪器和试剂 1．仪器 JP－303示波极谱仪 2．试剂 0.2mol/L的HAc-NaAc缓冲溶液（pH=4.6）， 维生素C（A.R） 四．实验步骤 1、配制Vc标准溶液（100μg/mL）：准确称取10.0mg的Vc，用0.2mol/L的HAc-NaAc缓冲溶液溶解、定容至100mL。 2、绘制标准曲线：（1）分别移取Vc标准溶液（100μg/mL）0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL于6个25mL的容量瓶中，用0.2mol/L的HAc-NaAc缓冲溶液定容；（2）分别测定各溶液的极谱峰电流，测定条件如下：线性扫描极谱法，二阶导数，扫描电位－0.2V0.2V，扫描速度 100mv/s，静止时间6s；（3）以电流强度对浓度绘制标准曲线，并求出相关系数。 3、样品测定：根据水果中Vc含量，称取一定量的水果样品（保证样品信号在工作曲线范围内），加少量水（约10mL），打碎匀浆，然后加5ml 冰HAc防止Vc被氧化，并用水定容至50mL，超声15分钟，过滤。测定滤液的极谱峰电流，根据标准曲线求出水果中的Vc含量。 实验七 水果中维生素C含量的测定 分光光度法 一．实验目的 用分光光度法测定水果中维生素C的含量 二．实验原理 Vc在酸性介质中可定量还原Fe(III)为Fe(II)，Fe(II)与邻二氮菲生成红色的络合物，此物在波长510nm处有最大吸收。 三．仪器和试剂 1、仪器 岛津1700分光光度计 2、试剂 (1) Vc标准溶液（100μg/mL）：10.0mg的Vc＋5mL冰醋酸，用水定容至100mL， (2) HAc－NaAc缓冲液：pH=4.74，0.2mol/L (3) Fe(III)溶液：0.1mol/L，称取硫酸铁胺（A.R）2.4g，用1mol/L的H2SO4溶解并定容至50mL (4)邻二氮菲：0.3%水溶液 (5)HCl溶液：10％水溶液 四．实验步骤 1．绘制标准曲线：分别移取Vc标准溶液（100μg/mL）0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL置于6支25mL比色管中，依次加HAc－NaAc缓冲液3.0mL，Fe(III)溶液3.0mL，邻二氮菲溶液1.5mL，摇匀后置于30℃的水浴中加热40分钟，然后用水稀释、定容至刻度，摇匀后，以不含Vc的试剂溶液作空白，在510nm处测量吸光度。以吸光度对浓度绘制标准曲线，并求出相关系数。 2．样品测定：（1）根据水果中Vc含量，称取一定量的水果样品（保证样品信号在工作曲线范围内），加少量水（约10mL），打碎匀浆，用10％HCl溶液定容至100mL，超声15分钟，过滤。