分离、精制 a．氯仿法取穿心莲内.ppt

* * 一、实验目的 1.掌握从穿心莲中提取、分离穿心莲内酯的操作方法。 2.学习去除叶绿素的方法。 3.熟悉α,β-不饱和内酯类成分的识别反应与薄层鉴定。 穿心莲内酯的提取、分离 二、基本原理 穿心莲中的内酯类成分易溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶剂，故利用此性质选用乙醇提取之；穿心莲中含有大量叶绿素，可用活性炭脱色法除去叶绿素杂质；利用穿心莲内酯与脱氧穿心莲内酯在氯仿中溶解度不同，初步将二者分离；利用穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯及新穿心莲内酯结构上的差异，而造成的极性不同，用氧化铝柱分离之。将穿心莲内酯制成亚硫酸氢钠加成物以增加其在水中的溶解度，用于制备注射剂。 三、操作要点 1.提取分离流程 2.提取 a．冷浸法：取穿心莲叶粗粉200 g，用80％乙醇浸润1h后装入容器中，分次加入5倍和4倍量（V／W）的80%乙醇浸渍，每次浸2天，合并2次浸出液，浓缩至500 ml左右，即为内酯类成分总浓缩液。 提取分离流程图 b．超声波振荡提取：取穿心莲叶粗粉200 g，用10倍量（V／W）80％乙醇分3次进行超声波振荡提取，每次30 min。合并3次提取液，回收乙醇至500 ml左右，即为内酯类成分总浓缩液。 3.脱色 将上述内酯类成分总浓缩液，加入原料量15％～20%的活性炭，加热回流30 min，趁热过滤，并用少量热乙醇分2次洗涤炭层，合并滤液与洗液，浓缩至原料量的10％（V/W），室温放置1～2天使析晶。滤取结晶，用少量95％乙醇淋洗粗晶，母液与洗液合并，再浓缩，放置析晶，滤取第二次粗晶，留作柱色谱样品。 4.分离、精制 a．氯仿法 取穿心莲内酯粗晶，称重，加入5倍量氯仿（V／W）振摇，冷浸放置1h（或加入3倍量氯仿（V／W）回流10 min）过滤，不溶部分再用热氯仿洗涤两次，氯仿中含有脱氧穿心莲内酯等成分，不溶解部分为穿心莲内酯。将此不溶物于50℃下干燥后，再加15倍（V／W）95％乙醇，加热回流溶解，稍冷后加入溶液体积1％的活性炭继续回流30 min，趁热过滤，滤液回收乙醇至半，放冷析晶，抽滤得精制穿心莲内酯，称重，计算得率。 b．氧化铝柱色谱法 取色谱用中性氧化铝6 g，加入8％水振摇均匀使活度呈W级，加入氯仿，搅拌，另取干净色谱柱（1.8 cm×28 cm），打开柱下口活塞，湿法装柱。称取穿心莲粗晶20 mg置蒸发皿内，用刮刀压碎后，加0.4 ml乙醇溶解，再加入中性氧化铝约0.3 g，拌匀后在红外灯下干燥，压碎，加到柱顶，呈均匀薄层带，再加小块棉花于柱顶，防止加洗脱剂时冲坏柱面。 按梯度洗脱，先以氯仿洗脱，用小三角瓶收集洗脱液，通过硅胶板上检查内酯成分出现时（用毛细管取洗脱液点在硅胶薄层板上，用Kedde试剂检出，加热后出现紫色斑点）开始收集第一流分，每份10 ml。继以氯仿-无水乙醇（20:0.1）、氯仿-无水乙醇（9.6:0.4）、无水乙醇、50％乙醇洗脱，收集流分20～22份，分别在水浴上浓缩各流分至小体积，硅胶H-CMC-Na板上检查，并用穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯及新穿心莲内酯对照品对照，相同流分合并，水浴上蒸干，用95％乙醇重结晶，可得穿心莲内酯纯品，称重，测熔点。