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实时荧光定量PCR技术用于MDS患者基因检测 苏州大学(医学版)2006;26(4)593 实时荧光定量PCR技术用于MDS患者基因检测 祁小飞,陈子兴 (苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所,江苏苏州215006) 摘要:目的探讨实时荧光定量PCRSYBRGreenI探针技术用于骨髓增生异常综合征(MDS)患者基因检测 的可行性.方法运用实时荧光定量PCRSYBRGreenI技术,检测21例MDS患者的SLC7A5基因表达情况,并 以IDA,ITP,增贫及其他贫血19例为对照组.结果实验组和对照组SLC7A5基因的表达无明显的统计学差异. 结论real—timePCR技术检测目的基因的表达是非常方便,快捷,准确的方法. 关键词:实时荧光定量PCR;骨髓增生异常综合征;基因 中图分类号:R551.3文献标识码:A文章编号:1673—0399(2006)04—0593～03 ApplicationofReal?timeQuantitativePCRinMDSPatientsDetecting QIXiao-fei,CHENZi—xing (LeukemiaResearchDivision,JiangsuInstituteofHematology,theFirstHospitalAffiliatedto SuzhouUniversity,JiangsuSuzhou215006,China) Abstract:0bjectiveToexplorethefeasibilityofreal—timequantitativePCR(QRT—PCR)in MDSpatientsdetecting.MethodsReal—timequantitativepolymerasechainreaction(RQ—PCR)assay wasestablishedandperformedtomeasurethetranscriptlevelofSLC7A5inthebonemarrowmononu— clearcellsfromMDSandotherpatients.ResultsSLC7A5transcriptswerenosignificantlydifference inMDSpatientsandtheothercontrols.ConclusionThereal—timeRT—PCRmethodisthemostsen— sitiveandprecisemethodcurrentlyforquantificationofRNAinthecel1. Keywords:real—timePCR;myelodysplasticsyndrome;SLC7A5 聚合酶链反应的出现使人们对微量甚至单个细 胞DNA的分析成为可能,并且由于其所具有的简 单易行,灵敏度高及所需样本少等优点,使其得到广 泛的应用….但由于传统的PCR技术不能准确的 定量,且操作过程中易污染,而致假阳性率高等缺 点,使其在临床上的应用受到限制J.因此寻求定 量检测的可靠方法就成为临床上迫切需要解决的难 题.几经探索,先后出现了多种定量PCR方法,但 其中结果最为可靠的是实时荧光定量PCR(real— timePCR)[3,.本研究将此项技术用于对骨髓增 生异常综合征(MDS)的SLC7A5基因检测中. l材料和方法 1.1标本共选择了40例病例,其中MDS21例 (RA12例,RAS3例,RAEB5例,RAEB—t1例), 缺铁性贫血(IDA),特发性血小板减少性紫癫 (ITP),增生性贫血,其他贫血19例.所有标本均 来源于本院门诊. 1.2试剂Ficoll淋巴细胞分离液购自上海试剂二 厂,MMLV购于Invitrogen公司,DEPC,RNAsin购 于Amereso公司,六随机引物,TaqDNA聚合酶, dNTPs由上海生工公司提供,TRIZOL购于Invitro— gen公司.PRIMER5.0软件设计引物,序列分别 为:SLC7A5:F5一GGAACATTGTGCTGGCAT TATACAG.R5一CCAGGTGATAGTTCCCGA AGTCC.actin:F5一AGGCCGGCTTCGCGG GCGAC.R5一CTCGGGAGCCACACGCAG CTC.由博亚公司合成后,稀释成i0ppm备用. 1.3方法模板的制备:TRIZOL抽提RNA,琼脂 糖凝胶电泳验证RNA质量,合格的RNA逆转录成 基金项目:国家自然科学基金资助课题(3047O733).江苏自然科学基金资助课题(BK2OO4O4O).江苏省135工程重点学科开放课题基金资助 (135XY0407)收稿日期:2005—04—06作者简介:祁小飞(1972一).男,江苏靖江人,讲师,医学博士,研究方向为白血