TUNEL联合免疫组化DcR3染色在肝癌组织切片检查中的应用分析.docVIP

精品论文 参考文献 TUNEL联合免疫组化DcR3染色在肝癌组织切片检查中的应用分析 广西玉林市第一人民医院 广西玉林 537000 摘要：目的 在肝癌组织切片检查中，使用DNA缺口末端标记（TUNEL）的同时，搭配使用免疫组化DcR3染色方式，分析应用效果。方法 选择2014年4月到2015年4月本院以手术方式切除的12例肝癌组织分别切片4张，1号切片单纯进行TUNEL，2号切片单独进行免疫组化诱捕受体3（DcR3）染色，3号切片先免疫组化DcR3染色随后进行TUNEL，4号切片先TUNEL后行合免疫组化DcR3染色，研究DcR3在病变组织中表达形式和细胞凋亡最适合联系方法。结果 14例肝癌组织切片样本中，1号切片中可判定11例细胞凋亡状况，2号切片当中有10例阳性，3号切片或者4号切片均能观察到11例细胞凋亡情况、10例免疫组化DcR3染色阳性。结论 在同1张肝癌组织切片上使用TUNEL的同时，搭配使用免疫组化DcR3染色的方法，可实现同时判定细胞凋亡与DcR3的表达形式。 关键词：TUNEL；免疫组化DcR3染色；肝癌组织切片 TUNEL技术主要用在原位检测细胞凋亡状况之中，属于分子生物学与细胞形态学相结合的研究方式，对处于无残缺状态的单个凋亡细胞核实施原位染色，可正确判定凋亡特点。DcR3是肿瘤坏死因子受体超家族中的一员，可以阻断细胞凋亡。 1.资料与方法 1.1一般资料 选择2014年4月到2015年4月在本院进行手术切除的12例肝癌组织样本，均通过甲醛固定和石蜡包埋处理。切片厚度均为4um，共4张。 1.2方法 将4张切片进行分号，便于研究。1号切片单纯进行TUNEL，2号切片单独进行免疫组化诱捕受体3（DcR3）染色，3号切片先免疫组化DcR3染色随后进行TUNEL，4号切片先TUNEL后行合免疫组化DcR3染色。在进行TUNEL联合免疫组化DcR3染色操作时，流程均按照说明书进行。 1.3判定标准 1.3.1免疫组化DcR3染色 只要细胞当中发现显著棕红色颗粒，该细胞为阳性，如其在25%分数以下为0，、25%到50%分数为1、51%到75%分数为2、在75%以上分数为3；根据样本中细胞是否存在染色、染色深浅判定分数，无染色分数为0、浅棕红色分数为1、棕红色分数为2、鲜红色分数为3。最后将以上两种评分方???的得分进行相加，分数在2以下的标记为（-）、2到3分标记为（+），4到5分及不少于6分分别标记为（++）和（+++），2分以上的均可判定为阳性。 1.3.2TUNEL判定依据 此方式处理的凋亡细胞颜色定位为蓝黑色，依据其各种特性进行判定，每例视野倍数定位在大于10倍的限度内，DMR+Q550病理分析设备统计的细胞数量在1000以上，统计范围内包含凋亡细胞，判定凋亡指数（AI），可以按照凋亡细胞数量比上1000的方式进行计算。 1.4统计学处理 全部资料使用SPSS19.0统计学软件进行处理，计量资料使用（）表示，使用t进行分析，计数资料使用检验，P＜0.05表示对比差异有统计学意义。 2.结果 使用TUNEL之后，凋亡细胞被标记成蓝黑色，位置被确定在细胞核，分布形式为散在；对于免疫组化DcR3阳性细胞而言，其细胞质内出现鲜红色颗粒，分布形式为弥散性、小型巢状，也可能散在分布。14例肝癌组织切片样本中，1号切片中可判定11例细胞凋亡状况，2号切片当中有10例阳性，3号切片或者4号切片均能观察到11例细胞凋亡情况、10例免疫组化DcR3染色阳性。在1个切片中使用不同的检测方式，会得到不同结果，在同1细胞之上，没发现凋亡细胞与表达DcR3共存的现象；4号切片中可同时观察到2中阳性物，其凋亡细胞黑蓝信号比3号切片强，而且3号切片的免疫组化阳性信号也被削弱。 3.讨论 真核细胞死亡方式中，细胞凋亡是较为普遍的一种。细胞凋亡之后，细胞核和细胞质会在组成方面出现较强的变化。检测凋亡细胞的方式很多，比如透射电镜检测法、TUNEL等。TUNEL检测速度较快，使用方便，其检查方式让原本的细胞凋亡分析工作出现了新的变化，可在很多类DcR3表达在癌症组织和细胞凋亡试验之中。 此次研究中，同时把TUNEL和免疫组化DcR3然后作为首选染色，研究表明，将TUNEL染色放在开始进行较佳，2种阳性物能够被明显发现，显示此种检测方式对免疫组化没有较大影响。如果将免疫组化放在开始进行，那么TUNEL检测到的凋亡信号就会因受干扰而变小，同时