天然药物化学（北京大学） 第三课.ppt

色谱分离法 色谱法（chromatography）：是一种分离和鉴定复杂混合物的有效方法。近来已被广泛应用于天然产物有效成分的分离提纯。对一些性质相近，结构类似化合物分离，采用经典的溶剂法和结晶法已不能达到分离的目的，使用色谱法往往可以收到很好的分离效果。 根据色谱分离原理不同，可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、大孔吸附树脂法、凝胶色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。 ①、吸附色谱法（adsorption chromatography）：是利用同一吸附剂对混合物中各种成分吸附能力的差异，而使各成分达到分离的目的的色谱方法。本方法特别适用于脂溶性中等分子量成分的分离。 各种吸附剂表面都存在着吸附活性，对不同的有机化合物，在吸附剂表面都表现出不同的吸附能力，这就是吸附色谱能分离不同物质的基本原理之一。吸附力的强弱是由吸附剂和被吸附物的性质决定的。用一定的溶剂系统展开时，由于溶剂与混合物里 各组分争夺吸附剂活性表面，因此，发生了吸附与解吸附的过程。解吸下来的组分与溶剂始终存在着竞争吸附作用，故随即又被吸附剂所吸附，吸附与解吸附过程一旦开始，就必定贯穿于整个色谱过程，直至色谱结束为止。 不同的化合物由于结构性质上的差异，展开剂对它们的洗脱能力和在吸附剂上的吸附、解吸附性能也是不同的。因而在吸附剂上移动的距离就不会相同，形成各种组分彼此程度不同的被分离，性质差异越大，分离效果越好。 吸附色谱法的分离效果如何，完全是由吸附剂和被分离物质的性质决定的。 通常所用的吸附剂有： 硅胶（silica）：为一多孔性物质，微显酸性，其吸附能力稍弱于氧化铝，可用通式SiO2·XH2O来表示。 氧化铝（aluminium oxide）：是常用的吸附剂之一，是由氢氧化铝直接在高温下（约600℃）脱水制得，由于制造关系常带有微碱性，对于分离植物中的碱性成分如生物碱颇为理想，但不宜用于醛、酮、酯和内酯等类型化合物的分离，因为有时碱性氧化铝可以与这些成分发生次级反应，如异构化、氧化和清除反应等。 聚酰胺（polyamide）：是一类由酰胺聚合而成的高分子化合物。商品名为绵纶、尼龙。对黄酮类、酚类、醌类、有机酸及鞣质的分离效果极佳，可使性质极相近的类似物质得到分离。此外，在生物碱、萜类、甾体、糖类、氨基酸衍生物及核苷类的分离上也取得了成功。 活性碳(activated carbon)：属于非极性吸附剂，有着较强的吸附能力，特别适合于水溶性物质的分离。 吸附色谱法的操作方式通常有薄层色谱和柱色谱法。 薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)：是一种快速、简便、灵敏的分离检识方法。薄层色谱将吸附剂均匀地铺在玻璃板上，把欲分析的样品点加到薄层上，然后用合适的溶剂展开而达到分离、鉴定和定量的目的。该方法不仅对分离鉴定天然产物成分起到了独特的作用，在分析化学、药物化学、染料、农药等领域，均得到广泛的应用。 薄层色谱的操作主要包括制板，点样，展开和显色四个方面。 柱色谱法（column chromatography）：也是天然产物成分研究中常用的色谱方法，实质上它是薄层色谱的另一种形式。其分离原理、吸附剂及洗脱剂的选择均与薄层色谱法相同。不同点在于柱色谱法是将分离材料均匀的加入到一定规格的玻璃柱里，再以适当的洗脱剂洗脱，使结构性质不同的成分达到分离。柱色谱法分离样品量大，故大多数情况下均为制备性分离。 ②、分配色谱法 ：是利用物质在互不相溶的两相溶剂中分配系数不同，而达到分离的一种色谱方法。 基本原理：其基本原理来自两相逆流萃取法。只不过是将互相饱和的一相溶液，设法吸着在某种惰性固体粉末或滤纸上，这一相就称为固定相，这种吸着了固定相的物质称为支持剂（载体或担体）。被分离物质置于固定相上，以另一相即移动相洗脱（或展开），样品中的物质就在固定相与移动相之间分配而达到分离。因此，分配色谱法由载体，固定液相，移动液相，被分离物质四部分组成。 支持剂：作为分配色谱的支持剂均为中性多孔的粉末，无吸附作用，不溶于两相溶剂中，不与被分离物质发生化学反应。并能吸附着一定量的固定相，移动相能自由通过而不改变其组成。常用的支持剂有硅胶、硅藻土、纤维素粉、滤纸等。 溶剂系统：分配色谱中的固定相和移动相统称为溶剂系统。 操作方式：分配色谱法的操作方式有纸色谱，分配