工业微生物 chap4 工业微生物学基本实验技术.docVIP

第四章 工业微生物学基本实验技术 工业微生物学是一门实践性很强的应用学科。它的建立和发展是以其实验技术和方法为基础的。微生物学实验技术和方法早已广泛地应用于现代生物工程的各个分支领域, 与此同时，随着分子生物学技术的发展, 各学科之间的相互交叉渗透, 又进一步丰富了微生物学实验技术和方法的内容。 现代的理工科大学本科生, 除了要掌握广泛而扎实的工业微生物学基础理论知识外，还要训练和掌握微生物学实验的基本操作技能, 同时也要了解或初步掌握先进的实验技术和方法, 跟上迅速发展的现代生物工程学科前沿的步伐。 本章根据理工科大学本科生的特点和学习任务，着重介绍工业微生物学的基本实验技术和方法, 内容包括：工业微生物的制片与显微技术、工业微生物的纯培养技术、工业微生物生理与发酵试验技术、工业微生物的检测技术等。 第－节 工业微生物的制片与显微技术 微生物最显著的特性就是个体极其微小。我们人这双肉眼的眼力不足，必须借助于显微镜, 才能观察到它们的个体形态及其内部结构。实际上, 正是由于显微技术的建立, 才使人类真正认识丰富多彩的微生物世界。因此，显微技术是一项很重要的技术, 熟悉并掌握显微镜操作技术是研究微生物不可缺少的手段。现代的显微技术, 除了用于观察生物体的形态和细微结构外, 还可与计算机结合用于对生物体组成分的定性与定量分析等。 本节要介绍的主要内容包括：(1) 工业微生物显微标本片制作技术：细菌染色标本片的制备, 放线普通光学显微镜显微镜显微镜显微镜细菌简单染色步骤：→ 涂片 → 干燥 → 固定 → 染色 → 水洗 →→ 观察。(图4 – 1) A. 加小滴水????? B. 涂成薄层??? C. 固定菌体 ?图4 – 1 涂片制备过程 (2) 细菌的革兰氏染色法 革兰氏染色法是细菌学中一种重要的鉴别染色法，按照细菌对此种染色法不同反应，可把细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两大类, 草酸铵石酸复红细菌不被酒精脱色，能保持结晶紫与碘的复合物而呈紫色，称革兰氏阳性细菌；细菌能酒精色，被复红复染成红色称为革兰氏阴性细菌。 → 初染 → 媒染 → 脱色 → 复染 → 干燥 → 观察。 (3) 细菌特殊结构的染色法 细菌的鞭毛、荚膜细菌鞭毛非常纤细、其直径为1020纳米， 才能镜检荚膜 其主要成分是多糖和多肽类，负染或 其原理是： 将菌体和背景着色, 把不易着色且透明的荚膜衬托出来, 易变形，一般芽孢染色法是根据芽孢和菌体对染料亲合力的不同，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同颜色而便于。脱色弱碱性 在加热条件下进行染色时，此不仅可以进入芽孢也可进入菌体。进入菌体的可水洗脱色，孢若再用复染（沙黄）进行复染，孢(红色孢绿色放线放线菌大多能形成两菌丝：潜培养基内生长的基内菌丝和向空气中生长的气生菌丝气生菌丝分化成各种子丝子丝各种形态子。 气生菌丝及孢子的形态和颜色是分类鉴定的重要依据。放线菌与细菌的单染色一样，可用石酸复红或吕氏美兰等染料着色后，在显微镜下观察其形态。为了观察放线菌自然生长状态下的形态特征,各种培养和观察方法, 其中印片法插片法玻璃纸法三种常用方法：印片法印片法是将放线菌的菌落或菌苔, 印在载玻片上,经染色后观察。法主要用于观察孢子丝子的形态等。插片法插片法将灭菌盖玻片插接种放线菌的琼脂平板上, 培养后, 菌丝沿着插片处生长而附着在盖玻片上– 2)。取出盖玻片, 置于载玻片上 可直接观察到放线菌自然生长状态和不同生长期的形态。 图4 – 2 插片法放线玻璃纸法透明的玻璃纸是一种半透膜。将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面, 将放线菌接种于玻璃纸上, 经培养后放线菌在玻璃纸上长成菌苔。玻璃纸, 固定于载玻片上直接观察放线菌的自然生长状态不同生长期的形态。酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，菌体比细菌大几倍至十几倍。酵母的无性繁殖方式为芽殖, 有的为裂殖;性繁殖是通过接合产生子囊孢子形成子囊孢子需要一定的条件,麦氏培养基有利于子囊孢子的形成。制备子囊孢子染色, 可在油镜观察子囊子、菌体和子囊呈色。制备水浸片即可观察酵母菌，若加入一滴美兰染色液，还可区别死活细胞（呈兰色的为死细胞，无色的为活细胞）, 因活细胞具有较强的还原能力，能使无毒性美蓝从蓝色的氧化型变成无色的还原型。霉菌具有复杂分枝的菌丝体, 分基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝分化产生繁殖菌丝, 再由繁殖菌丝产生子。霉菌菌丝较粗大，制片时容易收缩变形，孢子也容易分散为了得到清晰、完整、保持自然状态的，常用载片培养法和玻璃纸培养法进行制片观察。直接制片法法是将霉菌菌丝置于乳酸石炭酸棉蓝染色液中, 菌丝细胞不变形, 不易干燥, 能防止子飞散能保持较长时间