精选资料二：分子生物学工具酶.pptVIP

T4 DNA Ligase – LO tested 单位： Fermentas – 国际Weiss unit (ATP-PP exchange) NEB – 粘端连接单位 1 Weiss单位＝ 200粘端连接单位 相关产品： Rapid DNA Ligation Kit Rapid DNA Ligation Transformation Kit Reverse transcriptases AMV： 从禽类成骨髓细胞瘤病毒中分离，有RNase H活性，42℃时比M-MuLV稳定，最高逆转录温度高达72度（Finnzymes）。增加逆转录的特异性，适合具有二级结构的模板RT RevertAid M-MuLV (LO Test)： 从莫洛尼鼠白血病毒中分离，有RNase H活性。42度逆转录，最长可获得13kb的cDNA。 M-MuLV (RNase H- ) (LO Test)： 从莫洛尼鼠白血病毒中分离，消除了RNase H活性，适合合成全长的cDNA。 42度逆转录，最长可获得13kb的cDNA，产量比含有RNase H活性的酶要高很多。 Ribonuclease Inhibitors（RNA酶抑制剂） 概述 非共价1:1结合RNase，抑制RNases - A, B, C活性。 对Bacterial RNases – H, T1, 1, S1, U1, U2, CL3无效 LO Test：超纯，无其它酶蛋白污染 作用温度范围：25-55度，最佳反应稳定37度 适用PH值范围5.0-9.0 应用： RNA分离与纯化 体外转录，保证RNA转录本的完整性 cDNA合成： 保护模板RNA、增加cDNA产率、增加全长cDNA比例 RT-PCR：保护模板RNA，增加RT-PCR产率 碱性磷酸酶（AP) 应用: 除去载体和插入片段5’-磷酸基团，预防载体或插入片段自连 采用T4多聚核苷激酶标记DNA/RNA末端前，除去5’-磷酸基团 PCR产物测序前降解产物中的dNTPs 蛋白去磷酸化 功能描述： 水解ssDNA、dsDNA、ssRNA、dsRNA、核糖核苷和脱氧核糖核苷，释放磷酸基团 种类: 大肠杆菌碱性磷酸酶（BAP) 小牛肠碱性磷酸酶（CIAP) 虾碱性磷酸酶（SAP） Ribonucleases（核糖核酸酶） 除去DNA中的RNA 种类 RNase A –特异性水解RNA中C和U碱基 RNase T1 -特异性水解RNA中G碱基 RNase A/T1 Mix - RNase A和RNase T1混合物 RNase I NEW! – 序列非特异性，优先水解ssRNA 应用： 除去DNA溶液中的RNA，单核苷酸或寡核苷酸 RNase保护分析： RNA定位分析 印迹分析 DNaseI, RNase free 识别并切割ssDNA和dsDNA，产生单核苷酸和寡核苷酸 应用： 制备 DNA-free的RNA，用于RT-PCR 除去RNA转录系统中的DNA模板： DNA缺口翻译 DNaseI 印迹法 产生随机DNA文库 单链特异性3’-5’核酸外切酶，分解ssDNA 3‘-OH末端产生5’-单核苷酸。对单链DNA的特异性非常高，不分解双链DNA和RNA，80度加热15分钟失活。 Exo I, E.coli * 机械剪切力包括： 强力高速的溶液震荡、搅拌，使溶液快速的通过狭长的通道； 细胞突然至于低渗液中； 细胞爆炸式的破裂以及DNA样品的反复冻融。 重要影响大分子量的线性DNA分子。对分子量小的环状DNA分子影响相对较小 高温，以长时间的煮沸为例： 水沸腾时的剪切力 高温本身对核酸分子中某些化学健的破坏作用 所以选择低温操作，可降低核酸酶活性和反应速率，减少核酸降解 使用金属二价离子螯合剂如EDTA，柠檬酸盐等，螯合促进DNA酶发挥作用的金属二价离子，保存DNA完整性。 * 供应商特点： 美国权威的DNA抽提生产商，可以提供的产品有PUREGENE DNA抽提试剂盒、Generation DNA纯化系统和PURESCRIPT RNA抽提试剂盒都通过FDA论证，适合于科研和临床研究。 分子生物学工具酶 中晶生物 　 工具酶是一类用于DNA重组过程中不同DNA分子的制备、切割、修饰、扩增, 核酸分子的标记以及它们的核苷酸序列测定的酶。 概 述 分类： 限制性内切酶 连接酶 逆转录酶 DNA、RNA聚合酶 其它酶类 大多数来自不同的微生物和噬菌体 少数酶来自动物和动物病毒 另一些工具酶编码的基因也被克隆出来, 并用大肠杆菌细胞来生产这些工具酶。 一、限制性内切酶 5-G^A A T T