肾阳虚证骨关节炎温针疗效的差异基因表达谱研究＋-云南中医学院学报.pdfVIP

第34卷第4期 云南中医学院学报 V01．34No．4 2011年8月 ofYunnan I)fTraIIilionalChjne卵MPdicine 8．20ll J叫mal hlivP商ty 肾阳虚证骨关节炎温针疗效的差异基因表达谱研究+ 谭从娥1，王米渠2△，陆 明2 (1．陕西中医学院，陕西咸阳712046；2．成都中医药大学，四川成都610075) [摘要]目的：探讨温针治疗肾阳虚证骨关节炎的分子机制，为其疗效提供科学依据。方法：根据肾阳虚 证评定量表，选取典型肾阳虚证患者10名给予温针治疗两周，然后以其中疗效最好的4例治疗前后作基因芯片 杂交测试，采用sAM基因芯片数据分析软件，筛选显著表达基因作进一步的基因功能分析。结果：4例患者皆 为典型肾阳虚证，经温针治疗后效果明显。通过SAM软件筛选到32个显著表达基因，基因功能注释结果提示炎 症反应、信号转导类基因显著表达；分子通路主要集中于免疫及信号转导通路。讨论：温针治疗肾阳虚证膝骨 关节炎的疗效的分子机制是多方面的，涉及到炎症反应、免疫功能、信号系统等多方面的修复作用。 [关键词】肾阳虚证；骨关节炎；温针；差异基因表达谱 中图分类号：R24l文献标志码：A 文章编号：1000—2723(2011)04—0004—03 肾阳，又称命门之火，为人体阳气之根本，肾 三里(双)、膝眼(双)、阳陵泉(双)。选用华 阳虚的程度与疾病的发生发展有着密切的联系，加 佗牌针具针刺穴位，行针得气后留针，将华佗牌艾 之久病及肾，故肾阳虚证在l隘床上极为常见。肾主 条切成2cm1个，置于针柄上行温针灸，每次2壮 骨生髓，中医。肾的概念与骨关节炎发病理论上有着 约40min。每日1次，共治疗14次。 密切的关系。因此，本文借助中西医病证结合的方 1．3芯片实验 法，选取中医证为典型的肾阳虚证，西医诊断为单 4例患者分别于治疗前、后采血10mL，分离 纯膝骨关节炎的患者作为研究对象给予温针治疗。 获得白细胞，用TRIzol一步法提取细胞中的总 选择其中疗效最佳的病例，治疗前后对照作基因芯 片，对治疗前后的差异表达基因进行基因功能注 疗前后的实验样品的RNA反转录为cDNA。采用 释，为温针分子疗效评定奠定基础。 北京博奥生物芯片有限公司制备的cDNA人类全基 l资料与方法 因组表达谱芯片，将治疗前后的样品分别用cy3和 329克 1．1研究对象 cy5标记，标记后的样品同时与芯片上的2l 在中国四川省彭州市大保乡山区作肾阳虚证调 隆点进行杂交，芯片用ScanA丌ay急速的双通道激 查过程中。根据自编的40项肾阳虚辨证因子量 光扫描仪进行扫描。再采用GenePix4．0图像分析 表¨．21为评分细则进行评分，选取年龄为40岁以软件对芯片图像进行分析，把图像信号转化为数字 上，男女比例相近的典型肾阳虚证患者10名，符 信号；然后对芯片上的数据用Lowess方法进行归 合1991年美国风湿病学会推荐的膝骨关节炎诊断一化，最后ratio值为治疗后／治疗前。差异基因筛 标准∞J，给予温针治疗，然后以其中疗效最好的4 选标准采用倍数分析的方法，即以ratio或=2为 例于温针治疗前后采血对照作基因芯片。 上调基因，ratio或=0．5为下调基因。 1．2温针治疗方案 1．4基因芯片数据分析 of