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生物化学论文 萌发小麦种子淀粉酶酶学性质研究 课程名称：生物化学实验 学号：班级：生学1402 姓名：王玥 教师：李海涛 一、摘要： 1、在萌发小麦种子中提取淀粉酶，研究相关酶学性质，了解温度、PH值以及激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的影响，并且对酶的活力进行测定。 2、不同的温度、PH条件下和加激活剂或抑制剂情况下淀粉酶将淀粉水解的程度不同，产物遇碘呈现不同的颜色，由此可知道酶活性的最适温度和最适PH，也可知道激活剂能使酶的性增加，抑制剂能使酶的活性降低。对酶的活力进行测定时，是测定产物麦芽糖的量，来表示酶的活力。 3、麦芽糖能将3、5—二硝基水杨酸还原成棕红色的氨基化合物（520nm处有最大吸收峰），其颜色深浅与麦芽糖浓度成正比，利用分光光度法测定棕红色的氨基化合物吸光值，从而得到产物麦芽糖的量，来表示酶的活力[1]。 二、： 小麦种子，淀粉酶，温度，PH值，激活剂，抑制剂，酶的活力 麦芽糖 三、 淀粉主要存在于植物中，并且几乎所有植物中都存在淀粉酶, 尤其是在萌发后的禾谷类种子籽粒中淀粉酶活性更强。当种子萌发时, 贮藏物质淀粉在它们的作用下降解为简单的化合物, 供幼苗生长所需。正如我们所知，二十一世纪是生物信息时代，各种生物学领域研究层出不穷 ,对酶的研究是其中一个重要方面,目前对酶的研究已转入了后期，各种酶的生化性质也相继被研究出，酶是一种具有催化活性的蛋白质，由氨基酸通过肽链连接而成,只有在适当的温度、pH和离子强度下才具有生物活性,有些酶还需要辅酶或者辅因子[2]。通过此次实验研究，让我们进一步加深对淀粉酶的认识和学习，同时培养我们设计实验的基本思路，学会科学的实验组合，提出合理的实验方案,为以后研究其他种类的酶提供了研究方法和实验依据也为我们以后更多的设计型实验作好铺垫。小麦（由东北农业大学生命学院生化教研室提供） 取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表13-1加入试剂 管号1 2 3 4 5 6 麦芽糖标准液/ml0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 蒸馏水/ml2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0 麦芽糖含量/ml0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 3,5-二硝基水杨酸/ml2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 光密度值 0.4090 摇匀，置沸水浴煮沸5分钟。取出后流水冷却，加蒸馏水定容只20ml. 以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定光密度。以麦芽糖含量为横坐标，光密度纵坐标，绘制标准曲线。实验数据的记录如表 A光密度值 0.00 0.0000 0.20 0.0080 0.60 0.0770 1.00 0.1590 1.40 0.2550 1.80 0.3460 2.00 0.4090 1.2.2 温度对淀粉酶活性的影响 取8支试管，编号，按下表操作，并记录观察到的颜色。 温度对淀粉酶活性的影响 管号 A a B b C c D d 缓冲液（PH5.6）/mL 1 - 1 - 1 - 1 - 淀粉溶液/mL 2.5 - 2.5 - 2.5 - 2.5 - 淀粉酶提取液/mL - 1 - 1 - 1 - 1 预保温/min 4℃ 室温 40℃ 沸水浴 混合 A倒入a中 B倒入b中 C倒入c中 D倒入d中 酶促反应（10min） 4℃ 室温 40℃ 沸水浴 碘液 各3滴（滴管应先冷却至室温） 显色 管号 1 2 3 缓冲液/mL 2（PH3.0） 2（PH5.6） 2（PH8.0） 淀粉溶液/mL 各2.5 淀粉酶提取液/mL 各1 酶促反应（10min） 摇匀，40℃水浴10min 碘液 各3滴 显色 管号 1 2 3 4 缓冲液（PH5.6）/mL 各2 NaCl溶液/mL 1 - - - CuSO4溶液/mL - 1 - - Na2SO4溶液/mL - - 1 - H2O - - - 1 淀粉溶液/mL 各2.5 淀粉酶提取液/mL 各1 酶促反应（10min） 摇匀，40℃水浴10min 碘液 各3滴 显色 操作项目 α-淀粉酶活力测定 β-淀粉酶活力测定 Ⅰ-1 Ⅰ-2 Ⅰ-3 Ⅱ-1 Ⅱ-2 Ⅱ-3 淀粉酶原液/mL 1 1 1 0 0 0 钝化β-淀粉酶 置70℃水浴15min，冷却 淀粉酶稀释液/mL 0 0 0 1 1 1 缓冲溶液/mL 向各试管中加入PH5.6柠檬酸缓冲液 NaOH溶液/mL 4 0 0 4 0 0 1%淀粉溶液/mL 2 2 2 2 2 2 保温 在40恒温水浴中准确保温5min NaOH溶液/mL 0 4 4 0 4 4 实验结果： 2