DPPH法对红景天的发酵条件的筛选.docVIP

精品论文 参考文献 DPPH法对红景天的发酵条件的筛选 潘立东 崔香淑 　　（延边大学卫生毒理教研室 吉林延边 133000） 　　【摘要】目的 探讨发酵红景天提取物清除1, 1-二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基能力的最佳发酵条件。方法　实验用活性酵母发酵红景天后60%乙醇提取，并用80%乙醇去除鞣质、蛋白质和多糖，减压浓缩，采用DPPH自由基能力的方法比较不同发酵条件下的红景天提取物对DPPH自由基的清除能力。结果　发酵红景天提取物清除DPPH自由基能力的最佳发酵条件为酵母含量为总质量0.5%、葡萄糖含量为总质量0.5%和发酵时间24h。 　　【关键词】 红景天 发酵条件 1, 1-二苯基苦基苯肼 自由基 　　【中图分类号】R927 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2014）09-0375-02 　　发酵是指利用生物体（包括微生物、植物细胞等）的代谢功能，使有机物分解的生物化学反应过程。以适宜的培养基为营养，通过微生物的生长代谢和生命活动产生丰富的次生代谢产物。[1]中草药经发酵、生化转化后，其有效成分能被充分分离、提取；经生化转化后更具有生物活性，在中药现代化过程中具有重要地位。 　　人体内在氧的利用过程中，会因各种内在或外在的因素而产生各种活性氧和自由基。大量研究表明活性氧和自由基攻击人体细胞组织，可引发心脑血管、肿瘤等多种疾病，并促进机体的衰老。[2]摄食具有抗氧化作用的物质可有效预防和治疗有关疾病。[3]由于天然抗氧化剂比人工合成的抗氧化剂安全，因此越来越受到人们的关注。[4] 　　我国红景天属植物约占世界红景天种资源总量的80%。分布广泛，一般生长在高寒、干燥、缺氧、强紫外线照射、昼夜温差大的高海拔地带，具有极强的环境适应性和顽强的生命力。因其生长环境恶劣，使其具有抗氧化、抗疲劳、抗辐射、抗衰老、抗病毒，调节神经系统、心脑血管系统和提高免疫力等功效。[5][6]近年来国内外对红景天进行化学成分分析研究先后分离40多种化学物质。[7]由此可见，红景天在药用和功能性食品开发方面具有广阔的发展前景。本文探讨红景天抗氧化作用最佳提取工艺，为红景天药用和功能性食品开发方面提高生物利用度提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料、主要试剂及仪器 　　红景天栽培药材由延边红景天药材基地提供。粉碎，过60目筛备用。DPPH为WAKO公司产品，无水乙醇等试剂均为国产分析纯。DL-180超声仪为浙江产，DG5033A型酶联免疫检测仪：南京华东电子集团医疗装备有限责任公司，JD-300型电子天平：沈阳龙腾电子称量仪器有限公司，TG-328B型分析天平：上海天平仪器厂，恒温箱：上海跃进医疗器械一厂。 　　1.2 提取物的制备 　　准确称取一定量的红景天粉与三角烧瓶中，加入一定比例的酵母、葡萄糖，加入适量的双蒸水，放入37℃ 恒温箱中发酵的一定的时间后按药材与60%乙醇1∶8比例超声提取30min，提取2次，合并提取液，浓缩至一定量，用80%乙醇沉淀，上清液减压浓缩定容。 　　1.3 DPPH自由基标准溶液的配置与清除率的计算 　　DPPH自由基标准溶液的配置：准确称取DPPH试剂0.0256g，用无水乙醇定容到100mL，4℃ 冷藏备用，使用前无水乙醇稀释10倍使用。 　　DPPH自由基清除率的计算：清除率按下面公式计算，其中Ai、Aj和A0以无水乙醇作为空白，在波长490nm处测定吸光度，每组平行3次，取平均值。 　　公式中：A0为0.1mL DPPH自由基溶液+0.1mL无水乙醇的吸光值；Ai为0.1mL DPPH自由基溶液+0.1mL样品的吸光值；Aj为0.1mL 无水乙醇+0.1mL 样品的吸光值。 　　1.4 提取物清除DPPH自由基的测定方法 　　分别配置质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6和0.8mg?mL-1的发酵红景天提取物溶液作为待测液，吸取0.1mL待测液，加入96孔板中，再加入 0.1mLDPPH自由基溶液，反应30min，测定吸光度A值。 　　1.5 提取物清除DPPH自由基能力评价 　　评价抗氧化剂清除自由基的能力，经常选择自由基清除率达到50%是抗氧化及的质量浓度作为评价标准，即半数抑制浓度IC50值。IC50值越小，表示抗氧化剂清除自由基的能力越强，而IC50值越大，则表示抗氧化剂的清除自由基能力越弱。根据清除率公式计算出发酵红景天对DPPH自由基的清除率，以样品的质量浓度对DPPH自由基的清除率作图，得到清除率曲线，计算出IC50值。 　　2 结果与分析 　　对酵母、葡萄糖和发酵时间采用三因素三水平正交试验，从而选择最佳提取条件