东方田鼠自发上皮性卵巢癌的病理学研讨.pdfVIP

210 中国实验动物擘会第七届学术年套论文集2006年9月 条方田鼠自发上皮性卵巢癌的病理学研究 俞远京苏志杰周智君马亚东 (中南大学湘雅医学院实验动物学部，长沙410078) 【摘要】目的弄清东方田鼠自发性卵巢上皮癌的病理特点和组织学分类，了解东方田鼠卵巢癌的细胞生物学变化以及 癌细胞中相关基因的表达规律。方法在已建立的东方田鼠封闭群中收集患有自发性卵巢癌的病鼠，观察其发病的临床特征， 采用大体病理解剖和病理组织学方法，对其进行病理学分类，通过透射电镜和扫描电镜，观察癌细胞的超微结构和细胞表面 的卵巢癌动物模型。 ‘关键词】东方田鼠；卵巢癌：病理学；电镜；免疫组化 卵巢癌尤其是上皮性卵巢癌是妇科的一种重要肿瘤性疾病，由于其症状无特异性，因此卵巢癌的早期 诊断较为困难，卵巢癌一旦扩散，其5年生存率仅为2906。尽管对许多肿瘤的基础研究有了很大的进展， 但对妇科致死率极高的卵巢上皮癌的病因和分子过程还了解甚少，其主要原因是缺乏用于这类研究的动物 模型。… 在对东方田鼠进行的研究中，发现东方田鼠群中卵巢癌的自然发生率在成年雌性动物远远高于其它 动物，经临床与病理学观察，它们与人类相应的疾病有许多相同之处，弄清东方田鼠自发性卵巢上皮癌的 病理特点和组织学分类，了解东方田鼠卵巢癌的细胞生物学变化以及癌细胞中相关基因的表达规律，这对 阐明卵巢癌发病的机理有重要意义。…’ 1 材料和方法 1．1 东方田鼠繁殖和封闭群的建立 1994年中国科学院长沙农业现代化研究所研究人员从湖南省洞庭湖区，捕获了40余对野生东方田鼠 (长江亚种)，饲养在该所的动物室内。1998年12月中(南大学湘雅医学院实验动物学部从该所引进20 cm×28cmXl5 对东方田鼠，饲养在40 cm的塑料大鼠笼内，经过几年的驯化，东方田鼠己能进行稳定的 繁殖，饲养基本条件为：光熙周期10h明亮、14h黑暗；室温保持23C；饮水供应充足：饲料中粗蛋白 22％、粗脂肪3．19％、粗纤维8．41％。 1．2主要临床特征的观察 收集患病的卵巢癌东方田鼠，观察动物的发病年龄、体征、行为特征等临床症状。 1．3病理大体解剖与组织学特征观察 将自发性卵巢癌东方田鼠称重，打开胸腔和腹腔，观察心脏、肺脏、胸腺、隔膜、肝脏、脾脏、肾脏、 肠系膜淋巴结、大肠、小肠、卵巢、膀胱等脏器的自然位置、色泽、大小，是否有粘连等，记录是否有出 血、充血等。取少许病变组织置10％福尔马林固定液中，按常规进行石腊切片，H．E染色。将肿瘤按病理 组织学特征分为三级，”1 I(高分化)：乳头结构良好，乳头间质纤维轴心明显； [基金项目)湖南省实验动物专项基金：湖南省自然科学基金资助(03JJH4070) ．I翟耋銎笙篁生髦筌篁彗耋坚兰垦。；—。．．。；—。；；；；。些 Ⅱ(中分化)；乳头较密集，单独的纤维轴心少见；Ⅲ(低分化)：乳头基本消失，肿瘤以实性细胞巢为主。 1．4电镜形态观察 1．4．1 透射电镜将近1咖3大小卵巢癌组织块固定于多聚甲醛一戊二醛固定液中24h小时，用p：7．3浓 度为0．1=ol／LPBS缓冲液冲洗并过夜，逐级缓慢脱水，EponSl2浸透和包埋，超薄切片，日立透射电镜 观察，拍照。 1．4．2 扫描电镜将卵巢癌组织经适当修剪后，放入l％锇酸固定2h，取出后缓冲液漂洗3次，乙醇系 列脱水，醋酸异戊脂置模，临界点干燥，接着用电胶把样品粘于扫描电镜样品台上，经离子溅射仪镀膜后， 在JSIP5600Lv扫描电镜下进行观察、拍照。 1．5免疫组织化学检查 从收集的12例东方田鼠自发性卵巢癌中取标本8例，用正常卵巢组织作对照。标本均经lo％福尔马林 液固定，常规石蜡包埋，连续切片，厚4岫。采用免疫组化SP法，按说明书进行。实验用PBS缓冲液替代 一抗作阴性对照，选用已知染色阳性的肿瘤组织切片作为阳性对照。所有切片均先进行常规髓染色，明 确病理诊断。阳性信号为棕黄色，位于胞核、胞浆或／和胞膜上，按显色有无分为阴性和阳性，共检查了 P53，HSP27，HSPTO，HsPgo等基因的表达情况。 2 结果 2．1 临床特征 天后未见产仔，触诊检查没有胎儿，腹部柔软，有液体流动，动物精神尚可，活动能力稍微减少。随着动 物体重逐渐上升，从平均809左右上升至1809左右，腹部有继续膨大的趋势，活动能力受阻，隅居一处，