丝状真菌蛋白质组分析方法的建立研究.pdfVIP

^ C T 矗 ^BRIGULTURAE 华北农 学报 ·2012，27(增 刊)：93·96 B口REnLI-SIHIC^ 丝状真菌蛋 白质组分析方法的建立 李 锐 ，贺 亮 ，吴俐勤 (1．浙江省农业科学院农产品质量标准研究所，浙江 杭州 310021；2．上海医药工业研究院，国家(上海)新药安全评价研究中心，上海 201203) 摘要：旨在建立丝状真菌蛋白质组的分析方法，对丝状真菌蛋质 自学进行初步探索。使用液氮冷冻研磨、蜗牛酶 消化、尿素裂解、硫酸铵沉淀预分级和二维液相色谱分离相结合的蛋白质组研究方法进行丝状真菌的蛋 白质组分析； 建立的丝状真菌蛋 白提取分级分离方法有效的提高了蛋 白的分离效率和提取数量，可以应用在丝状真菌蛋 白质组研 究中，共鉴定了396个蛋 白，包括了参与各种细胞生理过程的蛋白，为进一步开展丝状真菌蛋 白质组的研究打下了良 好的基础。研究中建立的蜗牛酶消化破壁、尿素裂解的蛋 白提取方法，可以显著提高丝状真菌胞浆蛋 白的鉴定数量， 特别是对于那些功能重要但丰度低的蛋 白，适合于丝状真菌蛋 白质组的研究。 关键词：丝状真菌；蜗牛酶；尿素裂解 ；蛋 白质组 中图分类号：$855．4 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2012)增刊 一0093—04 Establishmentof’AnalyticalMethodinFilamentousfungalProteome LIRui，HE Liang。W U Li—qin ， (1．InstituteofQualityStandardsforAgriculturalProducts，ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences， Hangzhou 310021，China；2．ShanghaiInstituteofPharmaceuticalIndust~，National(Shanghai)Center ofrNewDrugSafetyEvaluationandResearch，Shanghai 201203，China) Abstract：TodevelopthemethodsofFilamentousfungalproteomeanalysisofrpreliminaryresearch．Liquidni— trogengrinding，snailasedigestion，urealysisandammonium sulfatefractionation，two—dimensionalliquidchromatog- raphyseparationmethodswasestablishedforapplicationinFilamentousfungalproteomeanalysis．Themethodin— creasestheefficiencyofextractionandseparationoftheproteinofrapplyingtoFilamentous ngalproteomeanaly— sis．396 rubrum proteinswere：unambiguouslyidentifiedinvolvinginmajorbiologicalprocessesandthisexperi— meritwasabasisofrfurtherfungalproteomicresearch．Theseresultssuggestedthatthisproteinextraction，prefrac— tionandseparationmethodswereeffectiveandsensitivefordetection interestproteinsinFilamentous ngalpro— teomeanalysis，especiallyimportantfunctionallow abundanceproteins． Keywords：Filamentousfungi；Snailase；Urealysis；Proteome 真菌，细菌和病毒都是人类和动物感染性疾病