影响奶牛活体采卵效果的主要因素研讨.pdfVIP

孛匡誊牧兽医学会动物繁殖学分会第+三滏学本爨毒寸会论文集 影响奶牛活体采卵效果的主要因素研究 麻柱1吴胜权2张瓤慧2薛建华2宣柏华2孙凤俊2桑润滋协 (1．河北农业大学动物科技学院，保定07100l；2．北京奶牛中心，北京100085) 捅 裴 通过对奶牛活体采卵(Ovum 卵效果较好，每头次可以获得6．9枚帮母细胞，霹收率为66．03％，优震努母细胞率为68．8毒％；以2 获卵8．6士1．85枚，均显著高于对照组，但回收率、优质卵母细胞率、卵裂率扣桑囊率与对照组差 异不显著。。 关键词 活体采卵； 体外受精； 卵母细胞； 应用OPU技术可以反复获得遗传价值较高的良种母牛大爨优质卵母细胞，通过体外受精后可以 获得大量遗传系谱明确的胚胎，从而更加充分地挖掘母牛的遗传潜力，缩短世代间隔，加速遗传进 之后，圈内外很多学者对该技术进行了大量研究。尽管OPU技术日趋完善，但依然存在着效率低的 问题，主要表现在获卵数少、回收率低。另外反复进行OPU对供体牛生产和繁殖机能有无影响还没 有得舞一致豹结论。本文研究了不同采郛受压、不弱采卵时间闯隔以及采卵前FSH处理对OPU效 果的影响，鐾在进一步提高OPU效率，使之更有效地应用于胚胎的体外化生产和转基因、核移植等 科学研究。 1材料与方法 1．1实验动物 供体母牛选自北京奶牛中心良种场。选择萤莽状况良好、繁殖机能正常且无其它疾病，年龄3_7 岁的健康母牛进行重复活体采卵实验。 1．2实验仪器 负压泵、恒温槽、持针器、采卵针(均为18G)和脚踏开关等。另外还需要胚胎过滤器、卵泡液收 集管、培养瓶、体视显微镜、恒温操作台、c02培养箱等。 1．3试刿 产)、盐酸普鲁卡因、耦合剂、新洁尔灭等。 1．4实验方法 1．4．1舞母细胞黔采集 作者简介：麻柱，1978年出生，硕士 搴：通讯作者 中隧畜牧兽瞧学会动物繁殖学分会第十纛篪学术研讨会论文集 采卵操作前先用2--．4ml盐酸普鲁卡因对供体牛进行尾椎硬膜外麻醉，麻醉要充分，否则直肠 的努责影响采卵。当供体牛尾部完全放松，自然下垂时表示麻醉充分。然后清除宿粪，用浓度为0，5％ 的薪洁尔灭消毒水清洗磐酲。把装有采卵液的离心管和集郛杯置于恒滠槽上，将集卵杯分别与负压 泵和穿刺针连接，然后先往集卵杯内抽吸少量采卵液以湿润其内壁，采卵管内也要充满采卵液。采 卵前将持针器与超声波探头固定在一起，探头表西涂抹耦含剂；∑只手将带有持针器的超声波探头 插入蘸道至鬻道穹隆处，另一只手通过盔肠把握卵巢，将卵巢隔着鬻道壁皓于探头之上。超声波探 头要充分深入，否则在固定卵巢时容易损伤卵巢的连系组织。穿刺前助手协助将穿刺针插入持针器。 操作者根据屏幕显示图像调整探头与卵巢的相对位置，使卵泡位于进针线上，此时开启真空泵并攘 进穿刺针对郛泡进行穿刺。充分抽吸后的卵泡腔将发生凹陷并呈现与周围组织相同的灰自色。采卵 过程中，血液凝固容易阻塞采卵针，此时要将穿刺针撤出，抽吸离心管内采卵液来疏通采卵管。确 认所有卵泡抽吸完全后，冲洗穿刺针及糨连的导管，以确保弗母细胞进入集郛棒。同样盼方法对另 一侧卵巢进行采集。 1．4．2卵母细胞的检查和鉴定 将收集管内卵泡液完全转移到胚胎过滤器，雳预热的采卵液反复冲洗胚胎过滤器蠹的舞泡液， 逝至清澈为止。留下适量含有卵母细胞的卵泡液，在体视显微镜下捡嬲卵子，用成熟培养液洗涤2 遍后进行鉴定分级。依据卵母细胞胞质均匀程度和卵丘细胞层数及完整性将卵母细胞分为4级：A 级，胞质均匀，卵丘细胞完整虽3层以上；B级，胞质均匀，卵丘细魔1．2层或不完整；C级，胞 质不均匀，卵丘细胞不完整；D级，胞质不均匀、裸卵或老化的卵母细胞；A、B级卵为可用卵。 1．4．3体外成熟、体外受精和体外发育 将可用麴郛母细胞焉采卵液洗涤1次，再用成熟培养液洗涤3次藤，移入预先在培养薇平衡忿 50 nl的受精小滴，并预平衡2h。取细管冻精解冻后用IVF。100稀释，在2000转离心洗涤两次，并 调整糟子密度。然屠淘受精奎演中鸯羹入约50la 4／ml l处理好静精予，使精乎最终浓度约力l×106 精子。将体外成熟的卵母细胞用受精液洗涤3次，移入受精小滴中，每滴放lO枚卵母细胞。精卵在 培养箱中共培养6h后取出，用发育液洗涤3次，吹打去掉部分卵丘细胞，移入预平衡好的发育液中 进行培养。 2结果