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免疫印迹法检测过敏原特异性IgE 56现代检验医学杂志第23卷第1期2008年i月JModLabMed,Vo1.23,No.1,Jan.2008 免疫印迹法检测过敏原特异性IgE 赵俊芳h.,王学谦.,丁红梅,孙晓慧.,潘春莹’ (1.天津医科大学,天津300120;2.天津长征医院,天津300120; 3.天津医院,天津300000;4.天津儿童医院,天津300000) 摘要:目的研帝j过敏原特异性IgE检测试纸条,对该试纸条的检测效能进行评估.方法将不同浓度的过敏原溶液点 样到固相载体.硝酸纤维素膜上,经过固定,封闭,洗涤步骤,加入待检血清,血清中的抗体与膜上的抗原反应,经酶一底物反 应显色,根据颜色判读结果,并与AllergyScreen过敏原检测系统进行对比.结果该法的灵敏度和特异性较好,与Aller— gYScreen检测系统符合率较高.食物过敏原检测阳性率高于AllergyScreen法.结论用硝酸纤维素膜检测过敏原特异 性lgE抗体,具有样本血清量少,操作简便,价格低廉等优点,具有较强的临床检测应用价值,为体外过敏原检测提供了新 的思路. 关键词:过敏原特异性IgE;硝酸纤维素膜;免疫印迹 中图分类号:R446.6文献标志码:A文章编号:1671—7414(2008)01—056—03 DetectionofAllergen—specificIgEwithImmunobloting ZHAOJun—fang..WANGXue—qian.,DINGHong—mei,SUNXiao—hui.,PANChun—ying’ (1.丁dinMedicalUniversity,Tia,2in300120,China; 2.TiainChangzhengHospital,Tiain300120,China; 3.TiainHospital,Tianjin300000,China;4.TianjinChildrenHospital,Tian9in300000,China) Abstract:ObjectiveTodevelopallergen—specificIgEdetectionstrip,andevaluatethedetectionperformanceofthisstrip. MethodsSpottedallergensolutionsofdifferentconcentrationontosolidcarrier—nitrocellulosefilters,andserumwas addedafterfixture,blockageandwashing.Resultwasdeterminedbycolorationinducedbyenzymaticreactivity.Results ThismethodcorrespondedwellwithAllergyScreendetectionsystem.Itsfoodallergendetectionpositiveratewashigher thanthatofAllergyScreensystem.ConclusionThemethoddevelopedhassuchadvantagesasfewserumsamplevolume, simpleprocedure,lowprice,goodspecificityandsensitivity.Therefore,ithashighclinicalapplicationvalue,andprovide newthoughtforallergendetectioninvitro. Keywords:a11egen—specificIgE;nitrocellulosefilter;immunobloting I型变态反应性疾病是一种常见病,影响了全 世界近四分之一的人口,被世界卫生组织列为二十 一 世纪重点防治的三大疾病之一L1].治疗与预防I 型变态反应性疾病的一项重要前提是检测患者对 何种过敏原过敏,而目前临床可供检测的过敏原有 二,三百种之多,常用的体外检测方法如酶联免疫 吸附试验(EIISA),放射性免疫吸附试验 (RAST)L2以及酶免疫法(EIA)等,因有操作步骤 繁杂,耗时费力且价格昂贵,所需血清样本量大等 缺点,不适合同时对多种过敏原进行检测. 本研究中笔者将过敏原包被在硝酸纤维素膜 (即NC膜)上,采用免疫印迹的原理用少量血清即 可完成多种过敏原特异性IgE的检测.结果表明, 该法的检测灵敏度与特异性较好,操作简便,可同 时完成对十几种过敏原特异性IgE的检测,克服了 传统检测方法的不足,为研制高效的体外过敏原诊 断试剂提供了思路. 1材料和方法 1.1主要试剂及仪器硝酸纤维素膜,过敏原冻 干粉(屋尘