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第二节 玻璃器皿的清洗操作 一、 新玻璃器皿的清洗 新购置的玻璃器皿含有游离碱，应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，再用水充分冲洗干净。 二、 载玻片及盖玻片的清洗 1、 新载玻片和盖玻片先在2%的盐酸溶液浸泡1小时，然后用自来水冲洗2~3次，最后用蒸馏水换洗2~3次。 2、 用过的载玻片，应用纸擦去油垢，然后散入煮沸的1%洗衣粉液中持续煮沸30分钟（注意煮沸掖一定要浸泡玻片，否则会使玻片钙化变质），待冷却后用自来水冲洗至中性。 3、 将用过的盖玻片放入1%洗衣粉液中，煮沸1分钟，待沸点泡平下后，再煮沸1分钟，如此2~3次，待冷却后用自来水冲洗干净。 三、 使用后平皿的清洗 1、 有细菌大量生长的平皿，首先需将培养皿进行45min/121℃灭菌，然后浸泡入1%洗衣粉液中约2小时，再用自来水冲洗。若有油脂黏附，可用刷子粘洗衣粉来擦洗，再用自来水冲洗干净。必要是用50ppm二氧化氯消毒液浸泡30min以上。 2、 无细菌生长的平皿，浸泡入1%洗衣粉液中约2小时，再用自来水冲洗。 3、 二氧化氯消毒液的配制：取消毒剂原液10ml和活化剂1ml，加入100ml自来水，静置5~10分钟，加入至1桶即可。 四、 使用后试管的清洗 1、 有细菌生长的试管培养物都必须先进行高压灭菌处理（45min/121℃），将培养物倒到废物桶后，将试管及发酵管口朝上浸泡在1%洗衣粉液中，要求浸没试管，浸泡2小时后用流动水反复冲洗3~5次，然后将试管口朝下斜靠在烘箱内壁，85℃以上干燥。 2、 无细菌生长的试管直接浸泡在1%洗衣粉液中，清洗方法同上。 3、 发酵管的清洗：发酵管因口径小，管内水不易排出，需反复用力甩3~5次，每次甩后用流动水冲洗。若仍难于洗净时，则可放入自来水中煮沸10~15分钟，冷却后再甩水。发酵管的烘干温度为100~115℃（100℃以下难于烘干）。 五、 移液管的清洗 1、 使用后的移液管若无油脂等难清洗物粘附，可直接用流动自来水反复浸泡冲洗3~5次，然后细口朝下斜靠在烘箱内100~115℃烘干。 2、 若移液管黏附有难清洗物的油脂、蛋白质等物时，则用自来水冲洗后放入1%洗衣粉中浸泡2~3小时后再用流动自来水冲洗干净，然后放入烘箱干燥。 六、 三角瓶的清洗 1、 有细菌大量生长的三角瓶，需先经45mi n/121℃高压灭菌后将培养物倒入废物桶，然后在放入1%洗衣粉液中浸泡1~2小时后再用流动自来水冲洗干净。 2、 若无细菌生长的三角瓶，也无油脂、蛋白质等难清洗物时可直接用流动自来水反复冲洗3~5次，然后口朝下斜靠在烘箱内壁烘干。 3、 若无细菌生长，但有油脂等难清洗物时，需先用1%洗衣粉浸泡2~3小时后再清洗，洗后用流动水冲洗干净后烘干。 第三节 无菌室的清洁消毒操作 一、 甲醛消毒方法 1、 每天由专人用沾有0.1%新洁尔灭消毒液的纱布擦拭无菌室台面及地板。 2、 在净化工作台面及地板上垫放一张报纸或牛皮纸，上面放1个250ML或500ML烧杯，杯内先加入高锰酸钾（用量为甲醛的一半）。 3、 按无菌室的空间构架每个烧杯加15~30ML甲醛，迅速关好门进行熏蒸4~6小时，同时开紫外灯。熏蒸完后，在烧杯内加上氨水进行中和，量与原液一致。 4、 一直开空调12~18小时湖检查室内是否仍有甲醛的刺激味，若有则继续开空调。 5、 消毒前与消毒后须 自然沉降菌。 6、 将消毒情况及时进行记录。 二、 二氧化氯消毒方法 1、 每天由专人用沾有0.1%新洁尔灭消毒液的纱布擦拭无菌室台面及地板。 2、 在净化工作台面及地板上放一个160MM玻璃平皿，根据无菌室的分布情况，每个平皿内加入原倍二氧化氯及活化剂（量约为平皿的2/3），迅速关好门进行熏蒸4~6小时，同时开紫外灯。 3、 熏蒸完后，将平皿及消毒液进行清理，然后开空调，直到无二氧化氯刺激味为止。 4、 消毒前与消毒后须做好自然沉降菌。 5、 将消毒情况及时进行记录。 三、注意事项 1、 严禁进入无菌室，消毒后通风至无甲醛或二氧化氯时方可进入，防止吸入较高甲醛蒸气或二氧化氯蒸气。 2、 消毒时要戴好防毒面罩及护目镜，一次性橡胶手套及工作服。 3、 用甲醛熏蒸一次，若室内污染严重时可适当缩短消毒周期，用二氧化氯进行熏蒸每个月一次，紫外强度1个月一次。 4、 用报纸盖住镜检室的所有仪器，以免仪器被腐蚀。 四、无菌室的构造 2 1 净化台 1 净化台 3 无菌一室 4 5 4 无 菌 二 室 5 2 3 缓冲二室 1 2 更衣室 1 2 1 缓冲一室 2 镜检室 1 第三节 耐热芽孢总数的测定 一、 样品准备 1、 在无菌