新乡市郊区绵羊弓形虫血清学调查.doc

河 南 科 技 学 院2004届本科毕业论文 新乡市郊区绵羊弓形虫血清学调查 论文作者姓名： 高 明 超 所 在 院 系： 动 物 科 学 系 所 学 专 业： 动 物 科 学 导师姓名职称： 王 承 民 论文完成时间： 2004. 05. 25 新乡市郊区绵羊弓形虫血清学调查 高明超 （河南科技学院动物科学系　河南 新乡 453003） 摘 要：为了调查2004年新乡市郊区绵羊弓形虫感染状况，从新乡市郊区散养农户采集羊血清50份，用微量间接血凝集实验(IHA)对血清样本进行检测，结果表明：50份血清样品中有8份阳性，平均阳性率为16％，从调查结果可以看出，新乡市郊区散养绵羊群中有弓形虫感染，但感染率不高，而且阳性率随年龄和体重的增加呈上升的趋势。 关键词：弓形虫；间接血凝试验；血清学； 引言 弓形虫( Toxoplasma gondii)，又称龚地弓形虫、弓形体、弓浆虫等，属原生动物门、孢子虫纲、球虫目艾美耳科，是一种人畜共患的寄生虫病。弓形虫病由肉孢子虫科(Sarcocystidae)的龚地弓形虫 (Toxoplasma gondii)引起的一种孢子虫病[1]。猫和其他家畜如猪、牛、羊、犬以及多种实验动物如小鼠和兔以至一些鸟类及冷血动物均可感染。人也可感染本病，所以又是一种人畜共患疾病。过去由于诊断水平不高，发现的病例不多，因而曾误认为是一种稀少病。现已查明，本虫呈世界性分布，动物和人的感染都极为普遍[2]。 近年来该病在我国时有发生，给养羊业带来了较大的经济损失，同时也给人民身体健康带来严重威胁，据报道，人群的平均感染率约25％--50％[3]，有人推算全世界约有1/4的人感染弓形虫.我国从50代起就陆续从猫、兔、猪、鼠等动物体内分离出弓形体。60年代发现人类病例，到70年代又发现猪群弓形体病大流行。目前已在我国大部分省市发现此病[4]。 为了解我们新乡市郊区绵羊弓形虫感染情况及分布规律。从2004年2月到5月份期间开展了本病的流行病学调查，现将结果报告如下： 1. 材料 1. 1 试剂 弓形虫IHA抗原诊断试剂（兰州兽医研究所购买），弓形虫标准阳性血清（兰州兽医研究所购买），弓形虫标准阴性血清（兰州兽医研究所购买），稀释液，灭菌蒸馏水。 1. 2 器材 96（12×8）孔110oV（聚苯乙烯）Finnpipette 数字式移液器（各型号），SK5200LH超声波清洗器，CHA-S 恒温振荡器，高压蒸汽灭菌锅，离心管（1ml,10ml）。 1. 3 被检血清 采自新乡市郊区绵羊静脉血，分离血清后置-20℃保存备检。 2．方法 2. 1 样本的采集及预处理 本试验的样本均来自新乡市郊区的小型饲养场或养殖户，每群按2％的比例耳静脉采血，每个样本采2ml，后用小型台式离心机以7500rpm的速度离心5min，除去沉淀，收取血清，以-20oC保存供检测之用。 2. 2 实验前准备 2. 2. 1 灭菌蒸馏水的制备 将制好的蒸馏水盛于容器内，用高压蒸汽灭菌锅121oC灭菌20～30min。 2. 2. 2 96孔微型反应板的清洗 先将反应板用清水冲洗，然后用SK5200LH超声波清洗器清洗二次，后放烘箱中烘干备用。 2. 2. 3 IHA抗原处理 在无菌室内每瓶IHA抗原用5ml灭菌蒸馏水稀释摇匀，装于10ml离心管内在3K-18高速台式冷冻离心机以1500～min，弃去上清液，加等量稀释液摇匀，置4oC24h后使用，即为诊断液。 2. 2. 4 标准阳性抗原及阴性抗原的处理 每瓶阳性血清及阴性血清用5ml稀释液稀释备用。 2. 3 方法与步骤 检测方法间接血凝试验（IHA）。 2. 3. 1 加稀释液 用Finnpipette 数字式移液器在96孔微型反应板上每孔家稀释液0.075ml，定性检查时，每个样品加4孔，一块反应板上可定性检查20个样品，每块板不论检几个样品，均应设阳、阴性血清对照,对照均加8孔。 2. 3. 2 稀释 定性检查时，稀释至第三孔。每份血清稀释成3个滴度(1：4，1：16，1：64)，定性的第4孔和对照的第8孔，为稀释液对照，按常规用取液器稀释。第一孔用Finnpipette 数字式移液器加被检血清0.025ml，混匀后，在第一孔内同样吸取0.025ml混合液加入第二孔内，以此类推以同样的方法加至第三孔，然后在第三孔内混匀，再吸取0.025ml混合液弃去，以后各样品方法同上[5]。 2. 3. 3 加阳、阴性对照血清 加至第20个样品后，开始加阳性、阴性血清做对照，阳性、阴性血清均加8孔，方法同上。 表1 被检样品及阴阳血清稀释倍数 孔号 1