米非司酮对妊娠中期小鼠子宫免疫状态的影响研究.pdfVIP

米非司酮对妊娠中期小鼠子宫免疫状态的影响+ 宫新城1钟秀会1宋春丽1刘占民1杨翠华1邓淑慧2 (1．河北农业大学中兽医学院河北定，Il073000：2．保定市膏牧局) 摘要：利用孕酮受体拮抗剂米非司酮阻断孕酮的作用，造成孕9d小鼠流产，测定子宫中IFN．Y、 由此可以推测注射RU486可以通过提高子宫IFN-y和TNF-a的含量和NK细胞的数量，导致小鼠流产。 在妊娠中期，孕酮对Thl反应具有抑制作用。 关键词：米非司酮：小鼠：生殖免疫 胎儿对于母体来说带有一半外来基因，在其发育过程中所表达的蛋白属于同种半异体 异源蛋白，按照经典的免疫学说，母体必然要对其产生免疫排斥反应。然而事实却是妊娠 得以维持，免疫排斥反应被抑制。母体怀孕后最明显的变化就是黄体持续存在并分泌孕酮， 而且在临床中见到许多免疫性疾病在妊娠过程中减轻，因此孕酮可能对子宫的免疫状态具 阻断孕酮的作用，观察子宫免疫状态的变化。 1材料和方法 1．1试验药品 小鼠TNF-a检测试剂盒、小鼠IFN．Y检测试验盒、小鼠抗人CD57 IgM单克隆抗体、 大鼠抗小鼠CD8+IgG单克隆抗体，购自北京岳泰科技有限责任公司；生物素化山羊抗小 鼠IgM、生物素化山羊抗大鼠IgG，购自北京中山生物技术有限公司；链霉菌抗生素蛋白 —过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒、液体DAB酶底物显色试剂盒，购自福州迈新生物 乙醇，加蒸馏水稀释至浓度150u咖Tll。 1．2试验动物 选取8～lO周龄的未经产纯种昆明系小鼠(购自石家庄河北医科大学)，常规饲养一 周后，眼观检查结合阴道涂片作发情鉴定。若涂片经姬姆萨染色，镜下观察全部为无核角 质化上皮细胞的小鼠定为发情，与公鼠l：1合笼过夜，于次日清晨检查，见有阴栓者定为 怀孕，记为孕0d。将孕9d小鼠30只随机分为2组：第1组，给小鼠皮下注射RU486lml／ 只；第2组为对照组，皮下注射蒸馏水lml／只。 ·国家自然科学基金资助项目(No ·335· 1．3检测 在处理后4i8、12、16、24h每组分别剖杀三只，观察小鼠子宫及胚胎的情况。取右 侧子宫．去除胎儿，匀浆，12000r／min冷冻离心，取上清液，按照试剂盒说明测定 TNF-q、IFN—Y的含量。 CD57+细胞、cD8+细胞的测定取左侧子宫，用波恩液固定，常规方法制备石蜡切片， 应用免疫组织化学方法染色，显微镜下计数阳性细胞 2结果 2．1阴道出血及剖检变化 给孕9d的小鼠注射RU486后，最明显的症状就是阴道出血．大约过12h，9只小鼠 中有8只出血，而另1只在剖检时发现只有1个胚胎．可能是因为出血少没有见到。注射 RU486后4h，子宫颜色粉红色，胚胎完好；8h可见子宫淤血，切开子宫内有血液；12h 可见子宫呈紫色，其中两只的胚胎已经死亡；16、24h几乎所有的胚胎都死亡，有的发生 吸收。而对照组没有发现出血现象，胚胎粉红色，正常。 2．2巧N—Y的测定结果 使用孕酮受体的拮抗荆RU486阻断孕酮受体后．可以发现孕酮在4h就已经升到一个 很高的水平。然后开始下降，至24h已经接近正常水平，但整体统计结果试验组IFN．Y的 含量明显高于对照组，差异显著(P0．05)，见表1、图1。 2．3TNF．Q的测定结果 含量也已经很高，但是随着时间的延长，呈下降的趋势，整体统计结果表明，注射RU486 可以明显的使TNF-a的含量升高，差异显著(P0．05)，见表1、图2。 2．4NK细胞测定结果 孕9d时，对照组NK细胞很少，主要分布在胚盘区，有时在子宫肌层形成一条细胞 带。由表2可以看出试验组NK细胞数显著高于对照组(Po．05)。 裹1IFN-Y、TNFod的含量(pg／g) 注：’差异显著(PO．05) ·336· 盖 盖 三 j ■ i 如 加 々