纳豆菌抗菌蛋白的抗菌作用方式的研讨.pdfVIP

第九届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会 湖南师范大学 纳豆菌抗菌蛋白的抗菌作用方式的研究 钟青萍‘王斌2刘坚真3钟士清1 (1华南农业大学食品学院 2华南农业大学科技开发总公司) 摘要考察了纳豆苗抗菌蛋白对敏感菌的抗菌作用方式，并通过扫描电镜和透射电镜进一步观察了敏感 菌经过抗菌蛋白处理后，细胞表面和结构的变化。结果表明抗菌蛋白对敏感菌具有杀菌作用，可改变细胞 的形态，引起细胞壁损伤，并进而使整个细胞受到破坏。 关键词：纳豆菌，抗菌蛋白，抗菌作用 寻求广谱、高效、安全的天然生物防腐剂是目前食品科学研究的热点之一…，而利用传统发酵 食品的菌种，从其培养物中分离出抗菌物质，是寻找天然生物防腐剂的一个行之有效的方法，长期 以来的实践证明，传统发酵食品的菌种及代谢产物是公认安全的(GliAs)[21o纳豆菌是日本传统发 酵食品的菌种，已被使用了2000多年。本课题组在国内首次对纳豆菌产生抗菌物质进行了研究。’“， 本文旨在探讨纳豆菌抗菌蛋白对敏感菌的抗菌作用方式。 自1932年发明电子显微镜以来，电子显微镜的应用范围日趋广泛，通过透射电镜超薄切片可进 行平面观察，通过扫描电镜可进行三维空间的立体表面观察。本研究亦采用了电镜技术，通过扫描 电镜和透射电镜，进一步观察纳豆菌抗菌蛋白对敏感菌的抗菌效果。 1材料和方法 1．1主要仪器 SANYO恒温培养箱 日本 BECIgMANN低温高速离心机 美国 HITACHI H-f00透射电镜 日本 HITACHI S-570扫描电镜 日本 HITACHI HCP一2临界点干燥仪 日本 HITACHIIB一3离子镀膜仪 日本 1．2对敏感菌的抗菌作用方式测试 1．2．1琼脂块再培葬法5“ 以无菌操作，从含有痢疾志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的检测平板中的抑菌圈内小心切下一小块琼 脂块(不要触及透明圈以外的区域)，放入装有液体培养基的试管中，振荡，将琼脂块打碎，摇匀， 于37C培养24h，取样涂平板，平板置37℃培养24—48h，观察有无菌生长。 1．2．2液体培养测试”“ 加入到含有纳豆菌抗菌蛋白的培养基中。同时设未加抗菌蛋白的对照组，37℃培养。定期取样测定痢 疾志贺氏菌的存活数，同时取样离心除去痢疾志贺氏菌，测定上清液中残留的抗菌蛋白的活性。 1．3 扫描电镜观察ScanningElectron_icroscope(SEM) 1．3．1取材固定 指示茵悬液于37C培养18h后，离心收集菌体。以pH7．2、0．01MPBS洗涤3次，然后用抗菌 94 第九届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会 液37℃处理一定时间。处理后的菌悬液离心收集菌体，菌体以2．5％戊二醛于4℃下固定lh，然后以 0．1M PBS洗涤3次。 1．3．2丙酮序列脱水 100％的丙酮进行脱水，每次20min。 1．3．3 醋酸异戊酯置换 将脱水后的标本以醋酸异戊酯处理2次，每次20min，以置换掉丙酮。 1．3．4 临界点千燥 将标本放入标本盒中，在临界点干燥仪的封闭标本室内进行临界点干燥。 1．3．5 粘样、镀膜 将干燥后的标本用导电胶粘在样品托上，待导电胶干燥后，将样品托放入离子镀膜仪中进行镀 膜。 1．3．6 扫描电镜观察 于20KV下观察。 1．4 透射电镜观察TransmissiOllEIectron Microscope(TEl／} 将经抗菌液处理的菌悬液离心收集菌体，菌体以2．5％戊二醛于4C固定4h，以0．OIMPBS洗涤 3次； 再以1％0S04于4C固定2h，以0．OIM PBS洗涤。菌体以1％琼脂预包埋，然后用50％、70％、 90％的乙醇进行序列脱水。