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基因工程常规技术 基因工程常规技术 琼脂糖凝胶电泳 SDS电泳 PCR技术 杂交技术 测序技术 琼脂糖凝胶电泳 1、原理： 2、用途： 3、技术要点 琼脂糖凝胶电泳的原理 1. DNA电泳迁移：电荷效应＋分子筛效益 （1）DNA带负电，电场中，向正极移动； （2）决定移动速度三因素：DNA大小，电荷数，构型； ( 3) 线性DNA分子移动速度与其分子质量的对数成反比； （分子量越大，跑得越慢） 2、检测原理： （1）溴化乙锭（EB）可插入双链DNA分子中，在紫外光照射下，发射荧光。 琼脂糖凝胶电泳用途 1. DNA分子量测定（距离－分子量） 2. 基因，克隆的鉴定（通过1完成） 3、不同长度的基因片断的分离 4、DNA浓度的测定 （荧光的强度与DNA含量成正比） *也可用于蛋白的分离鉴定 琼脂糖凝胶电泳技术要点 1.不同浓度凝胶分辨DNA片段能力不一样 (1)低: 不利于小片段的分辨(扩散) (2)高: 不利于大片段的分辨(迁移不动) (3) 一般选1.0% 2. 凝胶要用缓冲液配( TBE 或 TAE ) 3. EB强致癌，带手套操作； 4. agarose (琼脂糖）－－－电泳