牛病毒性腹泻粘膜病RTPCR一步法的建立.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十=发学术研讨会 3讨论 3．1本研究应用从临床发病奶牛体内分离鉴定的4株A。ma堆inale，根据无浆体属保守的 msp5基因设计·对特异性引物，建立了适用于诊断牛无浆体病的PcR诊断方法。 3．2特异性试验说明该PCR试验中A．ma嘻inale与牛巴贝斯焦虫、双芽巴贝斯焦虫、附 红细胞体、呔肠杆菌和健康牛血液之间无交叉反应。敏感性实验证明可检测的被感染最少红 。 细胞数约为200个，而且通过浓缩A．ma曙inaIe方法提高了该PCR方法敏感性。 3．3通过对临床样本的检测发现镜检阳性牛用PcR方法检测也有阴性情况出现，镜检阴 性牛用PCR方法检测也可以检测到阳性，说明镜检方法存在假阳性，这与染色不当时染色 液沉渣颗粒附在红细胞表面上产生误判有关。而且镜检方法只能在感染后16-26d检查到病 原体FJ，说明常规方法检验无浆体存在很大的局限性。该PcR方法对于隐性感染牛和感染 后耐过牛均敏感，可以克服传统镜检方法存在的主观性，适用于实验室快速诊断以及分子流 行病学调查，也为下一步利用重组的MsP5抗原建立ELIsA血清学诊断方法提供了金标