猪γ干扰素的分子克隆与在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

976囝2004学术年会 猪Y一干扰素的分子克隆与在大肠杆菌中的表达 姚清侠，钱平，李祥敏，徐卓菲，郭东春，金梅林，陈焕春 华中农业大学动物病毒室，武汉430070 摘要：采用RT．PCR技术从猪血淋巴细胞总RNA中扩增出猪干扰素vcDNA(SwlFN—v)。将 其克隆到pMDl8一T载体中，经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的SwlFN—v与已报道的猪Y 主茵不同时间的诱导摸索出最佳表达时间，经IPTG诱导后，得到高效表迭。包涵体纯化、变性、 复性后经细胞病变抑制法测定结果表明重组猪IFN—v具有较强的生物学活性。 关键词：猪y干扰素；原核表达 码166个氨基酸，其中前23个氨基酸为信号肽，后143个氨基酸组成成熟蛋白，不含有半胱氨酸。 IFN．y是由活化的T细胞及NK细胞产生，具有抗病毒活性和强大的免疫调节作用，尤其对某些病 越来越多的研究表明IFN．Y不仅能有效抑制病毒增殖而且在细胞免疫中也起到了重要的作用。 本试验成功克隆了猪IFN—Y全基因，并构建了包含信号肽的原核表达载体，实现其高效表达， 并对融合表达蛋白的提取、变性和复性进行了初步研究，为重组猪干扰素的工程化生产及应用奠定 了基础。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1菌种和