死亡受体6相互作用蛋白质的筛选与鉴定.pdfVIP

死亡受体6相互作用蛋白质的筛选与鉴定 王梁华，罗以勤，李茂，高云，球谊，孙铭娟，张兴群，倪健，焦炳华2 (第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室，上海200433) 及细胞的多种行为，与机体的生理和病理过程密切相关n卫1。截止目前，至少对19种配体和29种受体进 有报道伸’耵。本研究通过所建立的细菌双杂交系统筛选得到了可能与DR6相互作用的分子，对其中的丝氨 酸蛋白酶抑制剂家族分maspin进行了重组表达，并用胺化磁珠法分析了与DR6的结合。这些结果表明： 丝氨酸蛋白酶抑制剂家族可能为DR6相互作用蛋白。本工作为进一步阐明DR6的结构与功能打下了基础。 一、材料和方法 (一)试剂 BacterioMatch Stratagene two-hybridsystem，所带质粒由本室扩增保存，菌种传代保存。pMAL 表达与纯化系统，NEB公司产品。质粒由本室扩增保存。 各种抗生素、常用生化试剂购自北京鼎国生物技术发展中心和上海生工生物工程公司，工具酶(T4 DNA连接酶、限制性内切酶、Taq酶等)购自TaKaRa公司。 (二)引物与测序 DR6细胞外区域以PCR从pCM＼rFlag—DR6一Ec驴Fc上扩增