翻译-retention_time_shifts_with_notes.docxVIP

文稿边栏附注前言John Henderson：嗨，大家好！我是JohnHenderson，是安捷伦科技公司的一名应用科学家，这是MaureenJoseph，安捷伦HPLC色谱柱的产品销售经理。今天我们将谈谈保留时间的变化，以及如何定位故障原因并解决它们。Maureen：保留时间的变化（不同运行之间）可能是多种原因引起的：包括色谱柱老化、色谱柱污染、对应分析物的色谱柱/流动相组合不合适、不充分的色谱柱再平衡、流速或柱温的变化等等。鉴于有这么多潜在的原因，找到问题的起因就需要一些策略。John：问题基本上应出在您的色谱柱、仪器或者流动相三个方面。Maureen：是的。为了向您解释我们的意思，这里请看我们最近运行的一个例子 [insert one minute _analysis]。我们可以看到，不仅组分保留时间发生了变化，而且峰形极差！您的第一反应可能是：我是否从贮液瓶中泵入了正确的流动相？在您确认无误后，您很可能就会说：“这根色谱柱肯定是坏了！”当然，从更常见的可能性入手，我们考虑了很多可能的原因。#1-检查我们的ChemStation工作站上设置的方法参数是否正确，#2-重新配制流动相，#3-更换色谱柱。最后，当然，这个问题的原因可能是我们最后才会考虑到的，这是一个仪器的问题—[insert ALS_Injection_ fix.gif]自动进样器阀门的毛细管管线竟然连接错了！当然，您现在不太可能在实验室经常更换毛细管管线，但是在这种应用开发实验室里，在同一台LC上经常运行非常规的和往往差异很大的分析方法。多数LC仪器的模块化设计和多功能性使更换色谱柱和组件非常方便。在本例中，有人[point to someone off camera?]错误安装了毛细管管线。John Henderson：[讽刺地]那排查故障可是太有趣了。我那天可是要有大量工作要做了。Maureen：故障排查工作有时很令人沮丧，尤其是如果你沿着一个错误假设的方向走得很远的时候。因此，正如我们在许多视频片段中已经指出的，花些时间评估和缩小潜在原因的范围可以帮助您节省更多的时间。当然，这通常并不容易。要减少您自己的工作量可遵循一个很好的规律，即首先从最简单的事情入手。John：好的，让我们开始吧。我们将从较常见的原因和最容易的定位开始，排查使保留时间变化的潜在原因，然后再查找更复杂的原因并寻求解决方案。John Henderson是安捷伦化学品与耗材部的一名应用科学家。Maureen Joseph是HPLC色谱柱的产品经理。导致保留时间变化的原因可能是:色谱柱老化色谱柱污染对应分析物的色谱柱/流动相组合不合适不充分的色谱柱再平衡流速或柱温的变化色谱柱尺寸或流速的变化Maureen：有时人们会忘记在改变色谱柱尺寸的同时，需要调整系统和方法的参数来获得相似的结果。这些参数包括流速、梯度程序时间和进样体积。我们推荐使用LC方法转换软件帮助你实现这些。不同的仪器有不同的相应版本。请通过在A网页上搜索“LC方法转换器”找到适合自己的版本。这个软件会帮助您快速计算和调整系统/方法的参数以适应色谱柱尺寸的改变。该转换器尤其适用于梯度分析方法的转移。我们在另一段视频中较深入地讨论了梯度洗脱分析，但在这里我们还要提一下，因为这是一个我们遇到一些困惑的问题。让我们看看这个例子[show changing_column_length.gif]。好，我们来看一个梯度分离饮用水中残留农药和阻燃剂的例子。我们假设色谱分析人员从上面的色谱图中认识到存在分离度过大的情况，并且想到如果使用较短的色谱柱就可以节约大量的时间。但当简单地更换为原长度一半的色谱柱后，分析时间也就一定会相应地减少一半吗？确实这样做后出现了最差的结果，几乎没有节约任何时间[point arrow to timeline on lower chromatogram]。为什么保留时间没有像色谱柱长度一样减少50%？梯度程序时间保持了与原来相同的15分钟，并没有针对新的较短色谱柱的长度作出相应调整。所以正如您所看到的，保留时间并没有如您期望的减少。因为色谱柱的长度减少了50%，梯度程序时间也必须减少一半，以实现节省时间和保持相同分离效果的目的。现在，当我们改变梯度程序时间，减少一半来适应色谱柱长度和体积的变化时，我们看到分析时间也减少了一半[show column_length_2.gif]。John：这是证明相同原理的另一个例子，只是我们仅改变了流速来减少分析时间，而色谱柱长度不变。请看一张苯烷酮类化合物梯度洗脱分析的色谱图[show flow_rate_example.gif]。就像我们在等度洗脱分析中常做的一样，我们增加了60%的流速来加快我们的分析，但我们发现分析时间并没有减少60%，而且保留因子也已经改变，事实上，它们